【摘要】：目的探討apelin對脂多糖(LPS)誘導的大鼠肺微血管內皮細胞(PMVEC)凋亡、骨架改變的影響及作用機制。方法采用體外組織貼塊法培養(yǎng)大鼠PMVEC,激光共聚焦顯微鏡觀察LPS 10 mg·L~(-1)分別處理0,3,6,12,24和48 h PMVEC骨架結構的改變;另取PMVEC加入apelin 1和10 nmol·L~(-1)或p38抑制劑SB203580 10μmol·L~(-1)預處理,2 h后加入LPS 10 mg·L~(-1)作用24 h后,AnnexinⅤ/PI染色法檢測大鼠PMVEC凋亡,Western蛋白印跡法檢測凋亡相關蛋白BAX和BCL-2的水平;同時還采用Western蛋白印跡法檢測LPS 10 mg·L~(-1)作用0,5,15,30,60,120和240 min,或apelin 1和10 nmol·L~(-1)預處理2 h后加入LPS 10 mg·L~(-1)作用30 min后p38絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平的變化。結果激光共聚焦顯微鏡觀察結果顯示,LPS明顯誘導了大鼠PMVEC骨架重排,apelin 1和10 nmol·L~(-1)預處理明顯干預了LPS誘導的PMVEC應力纖維的形成和細胞骨架形態(tài)的改變。AnnexinⅤ/PI染色結果表明,apelin 1和10 nmol·L~(-1)預處理明顯抑制了LPS誘導的大鼠PMVEC凋亡,早期凋亡率由(43.8±4.6)%分別降至(33.7±6.9)%和(11.2±3.0)%(P0.05),晚期凋亡率由(54.3±3.4)%分別降至(29.5±4.6)%和(9.0±1.6)%(P0.05),并不同程度地逆轉了BAX和BCL-2的表達失衡情況(P0.05)。Western蛋白印跡結果顯示,LPS作用5 min即明顯誘導大鼠PMVEC中p38 MAPK磷酸化水平增高(P0.05),且在30 min時磷酸化水平達到最高(P0.01),apelin預處理明顯抑制了LPS作用30 min誘導的p38 MAPK磷酸化水平的增高(P0.01)。p38抑制劑SB203580預處理明顯抑制了LPS誘導的大鼠PMVEC凋亡,早期(36.7±3.8%)和晚期凋亡率(38.3±7.5%)分別降至(19.7±4.7)%和(15.7±3.6)%(P0.01)。結論 apelin明顯干預了LPS誘導的大鼠PMVEC骨架蛋白重排以及凋亡損傷,這一保護作用與其抑制p38 MAPK信號通路有關。
[Abstract]:Objective to investigate the effect and mechanism of apelin on (PMVEC) apoptosis and cytoskeleton changes induced by lipopolysaccharide (LPS) in rat pulmonary microvascular endothelial cells. Methods PMVEC, laser scanning confocal microscopy was used to observe the changes of the skeleton structure of LPS 10 mg L ~ (-1) treated with 10 mg L ~ (-1) for 24 h and 48 h, respectively. PMVEC was pretreated with apelin 1 and 10 nmol L ~ (-1) or p38 inhibitor SB203580 10 渭 mol L ~ (-1) for 2 h, then LPS 10 mg L ~ (-1) was added for 24 h, then Annexin 鈪，

本文編號：2245160