【摘要】：目的探討胍丁胺(agmatine,AGM)對(duì)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7氧化應(yīng)激的抑制作用及其機(jī)制。方法 RAW264.7細(xì)胞經(jīng)LPS(10μg/m L)刺激發(fā)生氧化應(yīng)激,同時(shí)AGM(1 mmol/L)對(duì)其進(jìn)行干預(yù)。分為對(duì)照組、LPS組、LPS+AGM組、AGM組。藥物作用24 h,以2,7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)為熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)一氧化氮(NO)水平;Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的iNOS蛋白及細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá);RT-PCR檢測(cè)Nrf2下游抗氧化酶血紅素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組相比,LPS可顯著增加RAW264.7細(xì)胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干預(yù)后上述指標(biāo)含量均明顯降低(P0.05)。AGM干預(yù)組中細(xì)胞核的Nrf2表達(dá)及其下游分子HO-1 mRNA表達(dá)水平較LPS單獨(dú)刺激組顯著升高,表明Nrf2信號(hào)通路在AGM的作用下被活化。結(jié)論 AGM可通過(guò)活化轉(zhuǎn)錄因子Nrf2促進(jìn)抗氧化酶HO-1的表達(dá),進(jìn)而減輕細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激損傷。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of agmatine (agmatine,AGM) on oxidative stress induced by lipopolysaccharide (lipopolysaccharides,LPS) in mouse macrophage cell line RAW264.7 and its mechanism. Methods oxidative stress was induced by LPS (10 渭 g / mL) in RAW264.7 cells, and AGM (1 mmol/L) interfered with it. The rats were divided into two groups: control group, lipopolysaccharide group, AGM group. For 24 h, the level of intracellular reactive oxygen species (reactive oxygen species,ROS) was detected with 2H7-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA as fluorescence probe. The level of nitric oxide (NO) in cells was detected by Griess method. Western blot was used to detect the level of iNOS protein and fine cytoplasm in cells. The expression of Nrf2 protein in nucleus was detected by RT-PCR. The expression of heme oxygenase (heme oxygenase-1,HO-1) mRNA in the downstream of Nrf2 was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results compared with the control group, lipopolysaccharide could significantly increase the levels of ROS,NO and iNOS protein in RAW264.7 cells. The expression of nuclear Nrf2 and its downstream HO-1 mRNA expression in AGM intervention group were significantly higher than those in LPS alone group, indicating that Nrf2 signaling pathway was activated by AGM. Conclusion AGM can promote the expression of antioxidant enzyme HO-1 by activating transcription factor Nrf2, and then alleviate the oxidative stress injury in cells.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診科;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所第一研究室 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃,2012CB518102)~~
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2204212