【摘要】：為了克隆巴馬小型豬細(xì)胞色素P4503A46基因,建立P4503A46穩(wěn)定表達(dá)肝癌細(xì)胞株(Hep G2-P4503A46),并探究其藥物代謝活性,通過(guò)RT-PCR從肝組織中釣取基因P4503A46,將基因與真核表達(dá)載體pc DNA3.1連接并轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,經(jīng)G418篩選10代,獲得穩(wěn)定表達(dá)重組細(xì)胞株Hep G2-P4503A46,以P4503A特異性代謝底物硝苯地平(NF)探針?biāo)幬?將探針?biāo)幬锱c重組細(xì)胞在優(yōu)化的細(xì)胞濃度、藥物濃度、孵育時(shí)間等條件下進(jìn)行體外孵育,通過(guò)高效液相色譜儀檢測(cè)其藥物代謝(抑制)動(dòng)力學(xué)參數(shù),并將對(duì)照組進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明,本研究成功從人Bama小型豬肝組織克隆了P4503A46基因,并通過(guò)G418篩選,成功建立了細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)株,其硝苯地平代謝活性顯著高于陰性對(duì)照組(P0.01);因此,成功克隆、并建立了小型豬P4503A46的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株(Hep G2-P4503A46),該細(xì)胞株具有顯著的硝苯地平代謝活性。
[Abstract]:In order to clone the cytochrome P4503A46 gene of Bama miniature pig, to establish P4503A46 expressing hepatoma cell line (Hep G2-P4503A46) stably, and to explore its drug metabolism activity, the gene P4503A46 was isolated from liver tissue by RT-PCR, and the gene was ligated with eukaryotic expression vector PC DNA3.1 and transfected into Hep G2 cell. The recombinant cell line Hep G2-P4503A46 was screened by G418 for 10 passages. The recombinant cell line Hep G2-P4503A46 was used as a specific metabolic substrate of P4503A, nifedipine (NF) probe drug was used to optimize the cell concentration and drug concentration. The pharmacokinetic parameters were measured by high performance liquid chromatograph (HPLC) and compared with the control group. The results showed that the P4503A46 gene was cloned successfully from human Bama small pig liver tissue, and the stable expression strain was successfully established by G418 screening. The metabolic activity of nifedipine was significantly higher than that of negative control group (P0.01). The stable expression cell line (Hep G2-P4503A46) of miniature pig P4503A46 was established. The cell line showed significant metabolic activity of nifedipine.
【作者單位】： 瀘州職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所;第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【基金】：國(guó)家“十五”科技攻關(guān)計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目資助課題(2004BA717B23)
【分類(lèi)號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 袁進(jìn);顧為望;;小型豬作為人類(lèi)疾病動(dòng)物模型在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年02期

2 李連峰;姜騫;林歡;李紅;劉家森;郭東春;原冬偉;崔玉東;曲連東;;巴馬小型豬主要細(xì)胞因子的克隆及序列分析[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2012年11期

3 商海濤;楊家大;魏泓;桂蓓;;小型豬肝臟細(xì)胞色素P450基因CYP3A29克隆與序列分析[J];畜牧與獸醫(yī);2008年05期

4 王世春;桂蓓;商海濤;劉宇;魏泓;;小型豬CYP3A88基因克隆與其他動(dòng)物的序列比較[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

5 顧陽(yáng);田雨光;岳敏;顧為望;;兩個(gè)國(guó)內(nèi)小型豬品種GH基因部分序列的多態(tài)性分析[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2012年12期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李治深;杜麗;劉濤;申明霞;王鳳陽(yáng);成鷹;陳品林;林杰材;滿初日嘎;祁超;;五指山小型豬APEX1基因cDNA的克隆及生物信息學(xué)分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年30期

2 鄭麗莉;朱宇旌;邵彩梅;張勇;;動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞色素酶P3A4與飼料黃曲霉毒素B_1毒性的關(guān)系[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2013年01期

3 張衛(wèi)國(guó);劉國(guó)華;狄長(zhǎng)安;張世民;金大慶;李衛(wèi)民;;豬膽石癥模型制作及腹腔鏡培訓(xùn)[J];腹腔鏡外科雜志;2014年01期

4 薛正楷;魏弘;;重組CYP3A46細(xì)胞微粒體體外藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年07期

5 蔡毅;盧康榮;陳妙良;楊婷婷;范存霞;王萬(wàn)山;顧為望;;實(shí)驗(yàn)用小型豬細(xì)胞色素P450酶研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年06期

6 錢(qián)坤;廖雯婷;李建軍;蔣鴻濤;周浩;龍建華;秦國(guó)慶;王毅;;齊墩果酸協(xié)同環(huán)孢素A延長(zhǎng)大鼠移植腎的存活時(shí)間[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年06期

7 周亞軍;關(guān)敏;;國(guó)產(chǎn)人工骨粉和Bio-oss骨粉對(duì)環(huán)形骨缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年06期

8 劉霞;鄭邦英;錢(qián)寧;吳曙光;王明鎮(zhèn);劉蕾;郭俊峰;;貴州小型豬胃粘膜5-HT及生長(zhǎng)抑素免疫反應(yīng)細(xì)胞的定位及表達(dá)[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2012年02期

9 王平;田維毅;王文佳;巫霞;劉霞;;成年貴州小型豬脾臟的組織形態(tài)學(xué)觀察及免疫組化研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2012年15期

10 劉霞;鄭邦英;郭俊峰;錢(qián)寧;吳曙光;王明鎮(zhèn);王平;田維毅;;貴州小型豬胃腸黏膜淋巴組織分布規(guī)律研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2013年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉宇;以洛伐他汀為典型藥物研究巴馬香豬和人代謝的異同[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬會(huì)強(qiáng);乳牙牙髓干細(xì)胞治療實(shí)驗(yàn)性根尖周炎的初步研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

2 孫愛(ài)榮;VA喹酸、環(huán)丙沙星和磺胺二甲嘧啶在大菱鲆體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及其代謝酶基因CYP3A的克隆與表達(dá)分析[D];上海海洋大學(xué);2012年

3 李連峰;PRRS典型毒株接種巴馬小型豬的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2013年

4 郭興;二維及多普勒超聲評(píng)價(jià)小型豬肝纖維化分期的實(shí)驗(yàn)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2013年

5 侯峗;小型豬內(nèi)耳發(fā)育形態(tài)學(xué)觀察[D];蘭州大學(xué);2013年

6 馬路平;自體PRP、PDLSCs聯(lián)合HA修復(fù)小型豬牙周骨組織缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

7 劉薇;DKK1轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆西藏小型豬的制備[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

8 鄭應(yīng)婕;小型豬七氟烷麻醉試驗(yàn)及其臨床麻醉效果評(píng)價(jià)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 宋少銳;廣西巴馬小型豬動(dòng)脈粥樣硬化模型制作的初步研究[D];廣西大學(xué);2014年

10 張雪燕;腫節(jié)風(fēng)顆粒對(duì)小型豬放射性肺損傷的防護(hù)作用研究[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳丙波,王傳廣,周建華,魏泓,王愛(ài)德,甘世祥;廣西巴馬小型豬和貴州小型香豬的DNA指紋分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年07期

2 莫毅;郭亞芬;梁方方;蘭干球;蔣和生;李柏;;廣西巴馬小型豬卵泡抑素的克隆及原核表達(dá)[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2007年10期

3 顏瑛;任軍;丁能水;郭源梅;麻駿武;肖石軍;李琳;周利華;黃路生;;GH基因在5個(gè)藏豬群體中的遺傳多態(tài)性分析[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;2007年06期

4 董曉英;牛欣;楊學(xué)智;高蔚;李海燕;陳冬至;;小型豬脈滑變模型的建立與評(píng)價(jià)[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2009年05期

5 陳欣;張小明;繆南東;鄧進(jìn);任勇軍;蒲宇;;介入栓塞法建立小豬心肌梗塞模型[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年04期

6 蔣益波;馮毅;丁建東;王宇;;豬急性心肌梗死模型的建立[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年06期

7 王文君,陳克飛,任軍,高軍,丁能水,李琳,黃路生;中外不同豬品種生長(zhǎng)激素基因遺傳多態(tài)性檢測(cè)[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2003年01期

8 畢建忠,來(lái)超,謝召宏,李玉亮,隋樹(shù)建,許順良;小型豬頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄模型的建立[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

9 朱順義,李文鑫;兩步PCR快速擴(kuò)增東亞鉗蝎BmKIT3 3'cDNA末端序列[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2000年01期

10 王愛(ài)德,郭亞芬,李柏,胡傳活,魏泓;巴馬小型豬血液生化指標(biāo)[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2001年01期

，

本文編號(hào)：2168170