本文選題：馬丁達比狗腎上皮細胞 + 有機陰離子轉(zhuǎn)運體　； 參考：《中國藥學(xué)雜志》2017年01期

【摘要】：目的建立能穩(wěn)定表達有機陰離子轉(zhuǎn)運體1(organic anion transporter,OAT1)的馬丁達比狗腎上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)細胞轉(zhuǎn)基因細胞模型,利用該模型初步篩選OAT1的抑制劑。方法采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將質(zhì)粒pcDNA3.1(+)通過Lipofectamine~(TM)2000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染MDCK細胞,并經(jīng)G418篩選獲得陽性克隆。通過OAT1的經(jīng)典底物6-羧基熒光素(6-carboxyfluorescein,6-CFL)在單克隆細胞內(nèi)的積聚量以及中藥單體存在時細胞內(nèi)的積聚量來檢測OAT1的活性。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-tinle PCR)檢測OAT1的mRNA的表達量。利用穩(wěn)定細胞株,研究了6-CFL在MDCK-mock和MDCK-OAT1細胞中的攝取、中藥單體對6-CFL攝取的抑制特性。結(jié)果 qRT-PCR結(jié)果表明,所建立的MDCK-OAT1細胞與mock細胞相比,OAT1 mRNA相對表達量為后者的4 862倍,攝取6-CFL的能力為后者的14.9倍。6-CFL在細胞株中攝取的K_m值為42.36μmol·L~(-1),部分中藥單體能顯著抑制MDCK-OAT1轉(zhuǎn)運6-CFL的能力。結(jié)論 OAT1抑制劑篩選模型構(gòu)建成功,并能快速有效地篩選出對OAT1有潛在抑制作用的中藥單體,為后期的基于OAT1的植物-藥物相互作用提供實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to establish a transgenic cell model of Madin-Darby canine kidneyne MDCK-1 cells which can stably express organic anion transporter (1(organic anion transporter OAT1) in the kidney epithelium of Martin Darby canine, and to screen the inhibitors of OAT1 by using this model. Methods the plasmid pcDNA3.1 () was transfected into MDCK cells by Lipofectamine~(TM)2000 transfection reagent by liposome transfection, and the positive clones were obtained by G418 screening. The activity of OAT1 was determined by the accumulation of 6-carboxyfluorescein (6-carboxyfluorescein 6-CFL) in monoclonal cells and in the presence of traditional Chinese medicine monomers. The mRNA expression of OAT1 was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) and quantitative real-tinle PCR. The uptake of 6-CFL in MDCK-mock and MDCK-OAT1 cells and the inhibition of 6-CFL uptake by traditional Chinese medicine monomer were studied by using stable cell lines. Results qRT-PCR results showed that the relative expression of OAT1 mRNA in MDCK-OAT1 cells was 4 862 times higher than that in mock cells. The ability of uptake of 6-CFL was 14.9 times of that of the latter. 6-CFL in the cell line was 42.36 渭 mol / L ~ (-1). Some traditional Chinese medicine monomers could significantly inhibit the ability of MDCK-OAT1 to transport 6-CFL. Conclusion the OAT1 inhibitor screening model was successfully constructed, and it can quickly and effectively screen out Chinese traditional medicine monomers with potential inhibitory effect on OAT1, which provides the experimental basis for the plant-drug interaction based on OAT1 in the later stage.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院廣東省新藥篩選重點實驗室;
【基金】：廣東省科技計劃項目(2014A020210013)
【分類號】：R94

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 鄧丹丹;劉彩云;廖志新;梁建英;盧建忠;;脂質(zhì)體熒光衰減技術(shù)預(yù)測10種中藥單體的被動吸收[J];分析化學(xué);2007年12期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張喜平;;中藥單體治療重癥急性胰腺炎的研究概況[A];第九屆全國中西醫(yī)結(jié)合普通外科學(xué)術(shù)交流大會暨膽道胰腺疾病新進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2005年

2 劉曉東;;中藥藥代動力學(xué)研究存在問題的探究[A];第八次全國藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

3 池島喬;沈燕;李陽芳;滕玉鷗;苗慶芳;費曉方;王毅;高曉霞;宮毓靜;王本祥;;中藥單體對與炎癥有關(guān)的細胞因子產(chǎn)生的雙相調(diào)節(jié)作用[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

4 閆昕;王新月;王建云;程瑞穎;;單味中藥及中藥單體治療潰瘍性結(jié)腸炎的研究進展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會脾胃病分會第二十四次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2012年

5 王貴年;王龍梓;;中藥單體對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抗菌作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

6 夏延哲;陳杰;潘裕華;陳孝;;六種中藥單體對人孕烷X受體介導(dǎo)細胞色素酶P450 3A4轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)作用[A];2013年廣東省藥師周大會論文集[C];2013年

7 李鉆芳;陳文列;陳榮;黃祖芳;;激光共聚焦顯微技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[A];第九屆中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

8 袁惠莉;汪璇;張麗娟;梁志剛;王曉民;;中藥在防治帕金森病中的作用及研究進展[A];中國生理學(xué)會第23屆全國會員代表大會暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要文集[C];2010年

9 黃建平;金永喜;朱文宗;;中藥保護腦出血后神經(jīng)恢復(fù)的研究進展[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第七次全國老年醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)術(shù)大會資料匯編[C];2012年

10 黃建平;金永喜;朱文宗;;中藥保護腦出血后神經(jīng)恢復(fù)的研究進展[A];2011年浙江省物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨康復(fù)新進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 葉桂華　李國平 劉月青 徐捷 周瑩;12家外資研發(fā)機構(gòu)進駐泰州[N];江蘇經(jīng)濟報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 任燕波;補腎中藥單體對mESC自我更新和分化的影響及機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 王文君;中藥復(fù)方更年春對β-淀粉樣蛋白致PC12細胞損傷的保護作用[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

3 周聯(lián);大黃素等中藥單體對HT-29細胞TLR4表達及MAPKs信號通路的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 尹延霞;中藥單體虛擬PDB文庫構(gòu)建及其解析[D];西南大學(xué);2015年

2 趙娜;三種中藥單體對高脂誘導(dǎo)的小鼠原代肝細胞脂肪變性的影響[D];蘭州大學(xué);2015年

3 張晉強;豬嗜血支原體血液直接PCR方法的建立及抗豬嗜血支原體中藥單體的體外篩選[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 楊惠;雞IFN-α-IL-18酵母表達及其與中藥單體聯(lián)合抗IBDV作用的研究[D];河南科技大學(xué);2015年

5 劉濤;三素中藥單體復(fù)方對慢性咽炎的治療作用[D];華北理工大學(xué);2015年

6 張凌杭;CAFs誘導(dǎo)腸上皮細胞表型改變及中藥單體的干預(yù)作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 曹敏;天然β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的篩選研究[D];貴州大學(xué);2016年

8 王明翠;幾種中藥單體對常見病原菌的抗菌作用及楊梅黃酮抗炎作用研究[D];吉林大學(xué);2009年

9 胡閃閃;兩種中藥單體光物理和光化學(xué)性質(zhì)研究[D];大連理工大學(xué);2014年

10 布瑋瑋;河南省PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查及體外抗病毒中藥單體的篩選[D];河南科技大學(xué);2014年

，

本文編號：1938637