本文選題：GES-1細(xì)胞 + MGC80-3細(xì)胞�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的 研究左氧氟沙星在GES-1及MGC80-3細(xì)胞上的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)特征及可能存在的轉(zhuǎn)運(yùn)體，初步探討藥物濃度、藥物孵育時(shí)間、溫度、細(xì)胞外pH值和轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑環(huán)孢素A、維拉帕米、西咪替丁對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量的影響。 方法 （1）將GES-1、MGC80-3細(xì)胞與含有100、200μmol·L-1的左氧氟沙星的Hanks液共孵育1、5、7.5、10、15、30、60min后收集細(xì)胞、比較不同時(shí)間，不同濃度對(duì)左氧氟沙星在兩種細(xì)胞上轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。 （2）將GES-1、MGC80-3細(xì)胞與不同pH值及不同溫度的含100μmol·L-1左氧氟沙星的Hanks液共孵育30min后收集細(xì)胞，比較不同溫度，不同pH值對(duì)左氧氟沙星在兩種細(xì)胞上轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。 （3）將GES-1、MGC80-3細(xì)胞與含有100μmol·L-1左氧氟沙星的Hanks液及P-糖蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑環(huán)孢素A、維拉帕米和有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑西咪替丁共同孵育1、5、7.5、10、15、30min后收集細(xì)胞，比較轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑對(duì)左氧氟沙星在兩種細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)上的影響。 （4）收集細(xì)胞樣本后經(jīng)反復(fù)凍融3次和超聲破碎細(xì)胞，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定胞內(nèi)藥物含量，考馬斯亮藍(lán)法定量細(xì)胞蛋白總量。用細(xì)胞內(nèi)藥物含量與細(xì)胞總蛋白量的比值作為觀察藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量的檢測(cè)指標(biāo)。 （5）建立GES-1和MGC80-3細(xì)胞內(nèi)左氧氟沙星檢測(cè)的HPLC方法：細(xì)胞裂解樣本經(jīng)冷凍離心機(jī)12000rpm·min-1離心15min，取上清加等體積甲醇沉淀蛋白，再次取上清并經(jīng)微孔濾膜過濾，用于測(cè)定左氧氟沙星濃度，HPLC條件：流動(dòng)相為乙腈-50mmol·L-1檸檬酸溶液-1mol·L-1醋酸銨溶液(17:82:1；v/v/v)，Welch C18分析柱，流速1.0ml·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)295nm，柱溫40℃，進(jìn)樣量20μl。評(píng)價(jià)專屬性、線性、準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性和靈敏度。 結(jié)果 （1）GES-1和MGC80-3細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量，1-5min時(shí)明顯增加，7.5-15min緩慢增加并達(dá)到穩(wěn)態(tài)。100μmol·L-1左氧氟沙星孵育1、30min時(shí)GES-1胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是0.945±0.030μg/mg、1.198±0.086μg/mg。100μmol·L-1左氧氟沙星孵育1、30min時(shí)MGC80-3胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是0.734±0.025μg/mg、1.007±0.041μg/mg。 （2）GES-1和MGC80-3細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量，，胞外左氧氟沙星濃度為200μmol·L-1時(shí)明顯大于100μmol·L-1(P0.05)。100μmol·L-1、200μmol·L-1左氧氟沙星孵育30min時(shí)GES-1胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是1.198±0.086μg/mg、1.618±0.215μg/mg。100μmol·L-1、200μmol·L-1左氧氟沙星孵育30min時(shí)MGC80-3胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是1.007±0.041μg/mg、1.414±0.052μg/mg。 （3）GES-1和MGC80-3細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量，孵育溫度為37℃時(shí)最大，37℃大于25℃(P0.05)，但明顯大于4℃(P0.01)。100μmol·L-1左氧氟沙星置于37℃、25℃、4℃孵育30min時(shí)GES-1胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是1.173±0.057μg/mg、1.024±0.080μg/mg、0.642±0.099μg/mg。100μmol·L-1左氧氟沙星置于37℃、25℃、4℃孵育30min時(shí)MGC80-3胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是1.001±0.072μg/mg、0.846±0.056μg/mg、0.599±0.048μg/mg。 （4）GES-1和MGC80-3細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量，pH值為7.4時(shí)最大，pH7.4大于pH6.4和pH8.4(P0.05)，但明顯大于pH值為5.4時(shí)(P0.01)。100μmol·L-1左氧氟沙星在pH5.4、pH6.4、pH7.4、pH8.4下孵育30min時(shí)GES-1胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是0.822±0.047μg/mg、1.078±0.076μg/mg、1.209±0.047μg/mg、1.090±0.070μg/mg。100μmol·L-1左氧氟沙星在pH5.4、pH6.4、pH7.4、pH8.4下孵育30min時(shí)MGC80-3細(xì)胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是0.724±0.036μg/mg、0.913±0.061μg/mg、1.040±0.094μg/mg、0.902±0.091μg/mg。 （5）P-糖蛋白抑制劑（環(huán)孢素A、維拉帕米）作用組，GES-1和MGC80-3細(xì)胞上的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量相近。100μmol·L-1左氧氟沙星+10μmol·L-1環(huán)孢素A孵育GES-1和MGC80-3細(xì)胞30min，胞內(nèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量分別是1.311±0.0850μg/mg、1.363±0.072μg/mg。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)下，兩種細(xì)胞藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量都較對(duì)照組增加，GES-1細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量較對(duì)照組增加約2.07%-13.23%（P0.05)，MGC80-3細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量較對(duì)照組增加約17.51%-35.30%(P0.05)。在有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑（西咪替�。┳饔孟聝煞N細(xì)胞藥物轉(zhuǎn)運(yùn)量較對(duì)照組無明顯改變。 結(jié)論 （1）左氧氟沙星在GES-1細(xì)胞和MGC80-3細(xì)胞上存在跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，轉(zhuǎn)運(yùn)有明顯的濃度、時(shí)間、溫度、pH值依賴性。P-糖蛋白可能參與左氧氟沙星在GES-1細(xì)胞上的轉(zhuǎn)運(yùn)，P-糖蛋白參與了左氧氟沙星在MGC80-3細(xì)胞上的轉(zhuǎn)運(yùn)。有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體不參與左氧氟沙星在GES-1和MGC80-3細(xì)胞上的轉(zhuǎn)運(yùn)。 （2）本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的檢測(cè)左氧氟沙星的高效液相色譜法方法，具有分離度好、準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性、靈敏度高的特點(diǎn)，可以用于檢測(cè)GES-1和MGC80-3細(xì)胞內(nèi)左氧氟沙星含量。
[Abstract]:Purpose

The trans - membrane transport characteristics of levofloxacin on GES - 1 and MGC80 - 3 cells and possible transporter were studied . The effects of drug concentration , drug incubation time , temperature , extracellular pH value , and trans - transporter inhibitor cyclosporin A , verapamil and simitedin on drug delivery were investigated .

method

( 1 ) GES - 1 , MGC80 - 3 cells were incubated with Hanks containing 100 , 200 渭mol 路 L - 1 levofloxacin for 1 , 5 , 7.5 , 10 , 15 , 30 and 60 min .

( 2 ) After incubation of GES - 1 , MGC80 - 3 cells with Hanks solution containing 100 渭mol 路 L - 1 levofloxacin at different pH and different temperatures for 30 min , the cells were collected , and the effects of different temperature and different pH values on the transport of levofloxacin on both cells were compared .

( 3 ) GES - 1 , MGC80 - 3 cells were incubated with Hanks solution containing 100 渭mol 路 L - 1 levofloxacin , P - glycoprotein transport inhibitor cyclosporin A , verapamil and organic cation transporter inhibitor simitedin for 1 , 5 , 7.5 , 10 , 15 , 30 min .

( 4 ) After collecting the cell samples , repeatedly freezing and thawing three times and ultrasonic breaking cells , the intracellular drug content is determined by high performance liquid chromatography ( HPLC ) , and the total amount of the cell protein is detected by the method of high performance liquid chromatography ( HPLC ) , and the ratio of the drug content in the cell and the total amount of the total protein of the cell is used as the detection index for observing the drug delivery amount .

( 5 ) HPLC method for detection of levofloxacin in GES - 1 and MGC80 - 3 cells was established : cell lysis samples were centrifuged at 12000 rpm 路 min - 1 for 15 min , the supernatant was collected and filtered through a microporous filter membrane to determine the concentration of levofloxacin , and the HPLC conditions were as follows : acetonitrile - 50 mmol 路 L - 1 citric acid solution - 1 mol 路 L - 1 ammonium acetate solution ( 17 : 82 : 1 ;
The specificity , linearity , accuracy , precision , stability and sensitivity were evaluated .

Results

( 1 ) The transport amount of GES - 1 and MGC80 - 3 cells increased significantly at 1 - 5 min , and the amount of intracellular drug transport was 0.945 鹵 0.030 渭g / mg , 1.198 鹵 0.086 渭g / mg and 1.198 鹵 0.086 渭g / mg , 1.007 鹵 0.041 渭g / mg respectively .

( 2 ) The drug transport capacity of GES - 1 and MGC80 - 3 cells was 1.198 鹵 0.086 渭g / mg , 1.618 鹵 0.215 渭g / mg and 1.618 鹵 0.215 渭g / mg 路 L -1 for 30 min , respectively .

( 3 ) The drug transport capacity of GES - 1 and MGC80 - 3 cells was maximum at 37 鈩

本文編號(hào)：1848742