發(fā)布時(shí)間：2018-03-28 19:10

  本文選題：液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀　切入點(diǎn)：B7011　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2014年碩士論文

【摘要】：眾所周知，藥物研發(fā)過程具有風(fēng)險(xiǎn)高、投資大、周期長(zhǎng)的特點(diǎn)。在藥物研發(fā)的臨床前階段，毒性問題是制約研發(fā)成功與否的主要問題之一，因此在藥物研發(fā)早期，嚴(yán)格淘汰因毒性問題不適宜進(jìn)一步研發(fā)的化合物，有利于降低投資風(fēng)險(xiǎn)、節(jié)約藥物研發(fā)成本。如何在研發(fā)早期盡早發(fā)現(xiàn)候選化合物的潛在毒性，從而加快藥物研發(fā)進(jìn)程、降低藥物研發(fā)費(fèi)用、提高研發(fā)成功率成為毒理學(xué)研究的重要方向。 近年來(lái)，抗菌藥物是目前臨床藥物治療中最常用的藥物，人們?cè)絹?lái)越重視抗菌活性及抗菌活性持續(xù)時(shí)間對(duì)抗菌藥物療效的影響，抗菌活性的持續(xù)時(shí)間主要與藥物的半衰期密切相關(guān)。目前用于治療G+菌包括耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡球菌(MSSA)、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)、鏈球菌等具有抗菌活性的藥物中，療效最為肯定的抗生素為萬(wàn)古霉素[1]，[2]、去甲萬(wàn)古霉素[3]、替考拉寧[4]等。但萬(wàn)古霉素的半衰期較短為6h，用藥間隔短[1]，[2]。去甲萬(wàn)古霉素[3]、替考拉寧[4]的半衰期也較短。鑒于國(guó)內(nèi)外對(duì)于抗菌藥物的需求形勢(shì)[5]，[6]，B7011為一種新型半合成糖肽抗生素，作用機(jī)制為抑制G+菌細(xì)胞壁的生物合成，被廣泛用作治療皮膚和軟組織感染的藥物。B7011對(duì)于G++菌包括耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡球菌(MSSA)、凝固酶陰性葡萄球菌(CoNS)、鏈球菌等具有抗菌活性，其具有抗菌活性強(qiáng)、沒有劑量限制性副作用、半衰期長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)。 本試驗(yàn)?zāi)康氖墙沂綛7011在動(dòng)物體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，闡明該藥物的吸收、分布、代謝和排泄過程及特點(diǎn)，為該藥物的藥效學(xué)和毒理學(xué)評(píng)價(jià)研究提供試驗(yàn)參考資料，并為設(shè)計(jì)和優(yōu)化臨床研究方案提供依據(jù)。 本研究建立和確證沉淀樣品的液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)方法，從分析線性范圍、批內(nèi)批間精密度、回收率、基質(zhì)效應(yīng)等指標(biāo)進(jìn)行方法確證。選擇SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，對(duì)B7011的吸收、分布、代謝和排泄進(jìn)行了部分的研究。 建立了分析測(cè)定SD大鼠血漿中B7011的LC-MS/MS的方法。對(duì)大鼠血漿方法學(xué)全面確證結(jié)果表明：空白SD大鼠血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾B7011的測(cè)定，方法的專屬性較好。B7011測(cè)定的線性范圍為30-20000μg/L，最低定量限均為30μg/L。SD大鼠血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L測(cè)定的批內(nèi)精密度(RSD%)分別為5.61-13.31%，2.31-8.35%，2.02-9.47%和4.0-15.0%，SD大鼠血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L批間精密度(RSD%)分別為10.05%、2.55%、3.75%和8.58%；B7011的基質(zhì)效應(yīng)85.90%~102.14%之間，60、1000和16000μg/L三個(gè)濃度測(cè)定的回收率為：114.12%、109.2%和101.06%。B7011未處理的血漿質(zhì)控樣品在4℃放置4h和-20℃放置且凍融3個(gè)周期后10天和71天條件下存放是穩(wěn)定的。大鼠血漿、膽汁、尿、糞和組織樣品中B7011測(cè)定的隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品的分析結(jié)果表明：上述生物基質(zhì)中B7011測(cè)定方法能夠滿足試驗(yàn)的需要。 建立了測(cè)定比格犬血漿中B7011的LC-MS/MS的分析方法。比格犬血漿方法學(xué)全面確證結(jié)果表明：空白比格犬血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾B7011的測(cè)定，方法的專屬性較好。B7011測(cè)定的線性范圍均為30-20000μg/L，最低定量限均為30μg/L。比格犬血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L測(cè)定的批內(nèi)精密度(RSD%)分別為4.17-15.80%，2.21-19.33%，3.08-7.01%和2.64-8.6%，比格犬血漿中B7011在60，1000，16000和10000μg/L批間精密度(RSD%)分別為5.08%、6.25%、6.61%和11.27%； B7011的基質(zhì)效應(yīng)為84.35%~92.31%之間，60、1000和16000μg/L三個(gè)濃度測(cè)定的回收率為：109.12%、106.05%和95.97%。B7011未處理的血漿質(zhì)控樣品在在4℃放置4h和-20℃放置且凍融3個(gè)周期后10天的條件下存放是穩(wěn)定的。 供試品分析方法學(xué)全面確證結(jié)果表明： B7011在220nm波長(zhǎng)有較大光吸收值，因此確定其為UV-2450紫外分光光度計(jì)測(cè)定該供試品的檢測(cè)波長(zhǎng)。B7011在2.5-80μg/mL檢測(cè)呈現(xiàn)有良好線性關(guān)系。B7011在6，30和75μg/ml測(cè)定的批內(nèi)精密度(RSD%)分別為0.29-0.67%，0.19-0.55%和0.23-0.42%，批間精密度(RSD%)分別為4.38%、2.25%和1.52%；在室溫放置4h、冷藏放置3d具有良好穩(wěn)定性，方法學(xué)驗(yàn)證表明該方法符合藥物濃度檢測(cè)的要求。分析了動(dòng)物給藥液濃度，SD大鼠試驗(yàn)所用的B7011系列濃度（0.025、0.5和3mg/ml）的偏差在0.54-5.54%范圍內(nèi)，保證了給予動(dòng)物藥量的準(zhǔn)確性。 SD大鼠單次靜脈注射B7011（0.25、5.0和30mg/kg，n=8只/劑量，，雌雄各4只），根據(jù)統(tǒng)計(jì)距參數(shù)，0.25、5.0和30mg/kg三個(gè)劑量組的AUC(0-t)分別為：26175.19±1859.60μg/L*h、580494.56±41805.61μg/L*h和3659621.61±420083.79μg/L*h;環(huán)比值為1.00：22.18：6.30,表明B7011在動(dòng)物體內(nèi)暴露量與劑量基本呈現(xiàn)線性關(guān)系；三個(gè)劑量組的平均駐留時(shí)間MRT(0-t)分別為：31.62±2.07h、27.1±1.38h和23.16±0.42h，消除半衰期t1/2z分別為：98.33±43.17h、88.48±37.47h和128.66±73.29h，三個(gè)劑量之間消除半衰期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明B7011在大鼠體內(nèi)消除慢，并且符合線性藥代動(dòng)力學(xué)特征。各動(dòng)力學(xué)參數(shù)無(wú)明顯性別差異。 SD大鼠以5mg/kg的劑量重復(fù)靜脈注射B7011，每4天靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥7次，n=8只/劑量，雌雄各4只。首次給藥后，B7011的主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)：AUC(0-t)為580494.56±41805.612μg·h·L-1，平均駐留時(shí)間MRT(0-t)是27.1±1.38h，消除半衰期T1/2z為88.4837.47h。末次給藥后的主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)：AUC(0-t)為990961.07±72683.71μg·h·L-1，平均駐留時(shí)間MRT(0-t)是33.91±1.85h，消除半衰期T1/2z為111.4548.55h。末次與首次給藥相比，AUC(0-t)體內(nèi)藥物暴露量增加到1.71倍，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05），MRT(0-t)和t1/2z均有一定延長(zhǎng)（P0.05）。此外，隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)，谷濃度有升高趨勢(shì)，說(shuō)明每4天給藥1次、連續(xù)7次給藥后藥物在SD大鼠體內(nèi)有一定的蓄積。 SD大鼠靜脈注射B7011（5mg/kg），8只/時(shí)間點(diǎn)/劑量，雌雄各4只。給藥后3個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)（1h、3d和6d），各組織臟器中B7011含量在雌雄大鼠之間無(wú)明顯差異。給藥后1h，血漿中藥物濃度最高，其次，腎臟、膀胱、脂肪中的藥物濃度相對(duì)也較高，其他組織臟器藥物濃度基本相當(dāng)。給藥后3d，血漿中藥物濃度明顯下降，腎臟、腎上腺、在肝臟上升，居前三位。給藥后6天，血漿中的藥物濃度繼續(xù)下降，腎上腺、腎臟、肝臟中的藥物濃度下降，但仍維持在相對(duì)較高水平。說(shuō)明給藥后藥物在腎上腺、腎臟、肝臟組織臟器內(nèi)分布濃度較高。 SD大鼠靜脈注射5mg/kg的B7011，在尿液收集過程中，0-5h,5-12h雌雄大鼠的排泄量有差異（p0.05）,其他時(shí)間段雌雄之間無(wú)差異（P0.05）。在膽汁和糞便的排泄過程中雌雄之間無(wú)差異（P0.05）。0～144h膽汁中收集到的B7011的量為給藥量的0.700.10%；0～480h尿液中收集到B7011的量為給藥量的14.685.91%；0～480h糞便中收集到B7011的量為給藥量的0.520.21%。糞便和尿液中共回收到B7011為15.20%。表明大鼠靜脈注射B7011后，吸收進(jìn)入體內(nèi)的藥物只有一小部分以原形被排出體外，其余藥物發(fā)生了代謝轉(zhuǎn)化。藥代動(dòng)力學(xué)藥效學(xué)研究表明：給藥組1mg/kg中B7011的藥-時(shí)曲線符合靜脈給藥趨勢(shì)的特點(diǎn)。模型對(duì)照組：隨著時(shí)間的延長(zhǎng)菌落個(gè)數(shù)增加。實(shí)驗(yàn)組：0-2h時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)組與模型組菌落計(jì)數(shù)比值變化不明顯；2-4h時(shí)間內(nèi)，四個(gè)劑量的比值變化呈現(xiàn)劑量依賴趨勢(shì)，4-12h模型組菌落數(shù)變化不明顯，此時(shí)間段菌落變化呈平臺(tái)趨勢(shì)；12-48h模型組菌落數(shù)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組4個(gè)劑量與模型組菌落計(jì)數(shù)比值變化明顯（比值下降到7至28倍），菌落數(shù)減少，抗菌效果呈現(xiàn)時(shí)間依賴性趨勢(shì)。結(jié)論： 1.本研究建立了分析測(cè)定SD大鼠血漿、組織、膽汁、尿液、糞便，以及比格犬和小鼠血漿中B7011的LC-MS/MS的方法。該方法的專屬性較好，線性良好，批內(nèi)、批間精密度符合方法學(xué)要求，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)樣品檢測(cè)影響小，沉淀蛋白提取標(biāo)品的方法回收率較高。 2. B7011溶液供試品分析方法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明符合方法學(xué)要求，并分析了動(dòng)物給藥液濃度，保證動(dòng)物給藥量的準(zhǔn)確性。 3.3個(gè)劑量（0.25、5.0和30mg/kg）的B7011單次靜脈給藥后在大鼠體內(nèi)基本呈現(xiàn)線性動(dòng)力學(xué)特征，消除半衰期長(zhǎng)，體現(xiàn)了本藥物的抗菌優(yōu)勢(shì)的動(dòng)力學(xué)特征。 4. SD大鼠以5mg/kg的劑量，每4天靜脈注射給藥1次，連續(xù)7次。與首次給藥相比，體內(nèi)藥物暴露量略有增加。此外，隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)，谷濃度有升高趨勢(shì)，說(shuō)明每4天給藥1次、連續(xù)7次給藥后藥物在SD大鼠體內(nèi)有一定的蓄積。 5. SD大鼠靜脈注射B7011（5mg/kg）后，給藥后3個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)（1h、3d和6d），各組織臟器中B7011含量在雌雄大鼠之間無(wú)明顯差異。給藥后藥物在腎上腺、腎臟、肝臟組織臟器內(nèi)分布濃度較高，而且排泄較慢，有一定的蓄積趨勢(shì)。 6.大鼠靜脈注射給予B7011后，吸收進(jìn)入體內(nèi)的藥物只有一小部分以原形被排出體外，其余藥物發(fā)生了代謝轉(zhuǎn)化。 7.建立的小鼠金黃色葡萄球菌感染敗血癥模型，數(shù)據(jù)初步研究表明，該模型穩(wěn)定可靠，藥物抗菌藥物治療效果顯著，可用于進(jìn)一步抗菌藥的藥效藥代模型研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉麗萍;用于治療炭疽病的新型抗生素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2003年05期

2 方寧;美研制新型抗生素治肺結(jié)核[J];中國(guó)健康教育;2005年01期

3 羅曉茹;;新型抗生素將出現(xiàn)?[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2006年06期

4 ;美國(guó)發(fā)現(xiàn)新型抗生素[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2006年22期

5 徐紅蓉,陳偉力,李雪寧;新型抗生素——利奈唑烷[J];中國(guó)藥師;2004年02期

6 夏秀靜;劉欣;宋敏;;合理應(yīng)用新型抗生素的臨床體會(huì)[J];實(shí)用藥物與臨床;2006年03期

7 蘇蕾;馬玉貞;張廣洲;;新型抗生素的研究進(jìn)展及研發(fā)趨勢(shì)探討[J];齊魯藥事;2007年08期

8 殷瑜;戈梅;陳代杰;;新方法新技術(shù)與新型抗生素發(fā)現(xiàn)[J];微生物學(xué)通報(bào);2013年10期

9 李有觀;;新型抗生素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);1992年18期

10 邵肖梅;新型抗生素在新生兒感染性疾病中的應(yīng)用[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;1998年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 王曉蓉;潘景業(yè);林錫芳;周小潔;;綜合性ICU敗血癥致病菌的變遷和對(duì)策[A];2006年浙江省危重病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 肖謙;平民化消費(fèi)，新型抗生素的出路[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

2 郭文;新型抗生素誕生阻力重重[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

3 P A Francis 編譯 朱軍生 張愛敏;美敦促加快新型抗生素研發(fā)及審批[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

4 衙外;能否將新型抗生素納入管制藥品？[N];中國(guó)商報(bào);2007年

5 徐錚奎;德英聯(lián)手開發(fā)新型抗生素[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

6 ;新型抗生素[N];經(jīng)濟(jì)參考報(bào);2003年

7 明月 編譯;新型抗生素ＣＢＲ７０３殺菌不傷人[N];大眾科技報(bào);2003年

8 記者 李天舒;蛇毒有望用于新型抗生素研制[N];健康報(bào);2012年

9 葛秋芳;德國(guó)發(fā)現(xiàn)新型抗生素MMA[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

10 常訊;新型抗生素Zyvox[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2000年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 石立瑩;新型抗生素S632A_3體內(nèi)外抑制單純皰疹病毒Ⅰ型增殖及對(duì)感染小鼠腦組織保護(hù)作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

本文編號(hào)：1677668