內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)”新假說(shuō)新靶點(diǎn)的老年性癡呆中藥干預(yù)研究
本文關(guān)鍵詞:基于“肝郁氣滯—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)”新假說(shuō)新靶點(diǎn)的老年性癡呆中藥干預(yù)研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
《湖北中醫(yī)藥大學(xué)》 2013年
基于“肝郁氣滯—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)”新假說(shuō)新靶點(diǎn)的老年性癡呆中藥干預(yù)研究
戎志斌
【摘要】:目的 1.證明中藥復(fù)方多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多層次的整體性調(diào)節(jié)方式的作用機(jī)理及其化學(xué)機(jī)制,為進(jìn)一步研究中藥復(fù)方治療阿爾茨海默病.奠定基礎(chǔ)。 2.揭示Aβ1-40誘導(dǎo)的AD細(xì)胞模型和病證結(jié)合動(dòng)物病理模型在ERS和UPP功能障礙上的分子病理基礎(chǔ)和特點(diǎn)。 3.闡明疏肝解郁法對(duì)對(duì)AD的細(xì)胞和動(dòng)物病理模型ERS及ERAD(UPP)系統(tǒng)的多靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)作用。 4.觀察疏肝解郁法對(duì)神經(jīng)細(xì)胞ERS模型、AD細(xì)胞模型和AD動(dòng)物模型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解通路的影響,從基因分子水平探討其藥效學(xué)機(jī)理。 5.探討“肝郁氣滯-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)”假說(shuō)的科學(xué)內(nèi)涵,為重大疑難疾病老年性癡呆的中醫(yī)藥防治提供新的靶點(diǎn)、開(kāi)辟新思路。 方法 本課題通過(guò)以下幾個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究: 1.實(shí)驗(yàn)通過(guò)利用SELDI(蛋白芯片質(zhì)譜儀)對(duì)柴胡疏肝散含藥血清和安理申含藥血清進(jìn)行檢測(cè),使柴胡疏肝散含藥血清、安理申含藥血清和空白組含藥血清之間飛行時(shí)間質(zhì)譜柱狀圖之間對(duì)比。 2.采用高效液相色譜(HPLC)對(duì)該復(fù)方含藥血清、水煎劑和含藥血清對(duì)NG108-15神經(jīng)元細(xì)胞株干預(yù)后進(jìn)行了細(xì)胞內(nèi)藥物成分檢測(cè)研究。 3.實(shí)驗(yàn)用經(jīng)老化處理的Aβ1-40對(duì)NG108-15神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo),使其成為AD細(xì)胞模型,并把未誘導(dǎo)和誘導(dǎo)后的細(xì)胞分成6個(gè)組,分別用正常兔血清、安理申兔含藥血清、高中低濃度柴胡疏肝散含藥血清進(jìn)行干預(yù),干預(yù)結(jié)束后進(jìn)行熒光染色和流式細(xì)胞儀細(xì)胞凋亡測(cè)試,另外還對(duì)不同組細(xì)胞進(jìn)行ERS、UPP標(biāo)志性分子的測(cè)試。 4.實(shí)驗(yàn)用衣霉素(TM)對(duì)NG108-15神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo),使其成為ERS細(xì)胞模型,并把未誘導(dǎo)和誘導(dǎo)后的細(xì)胞分成6個(gè)組,分別用正常兔血清、安理申兔含藥血清、高中低濃度柴胡疏肝散含藥血清進(jìn)行干預(yù),干預(yù)結(jié)束后進(jìn)行熒光染色和流式細(xì)胞儀細(xì)胞凋亡測(cè)試,另外還對(duì)不同組細(xì)胞進(jìn)行ERS、UPP標(biāo)志性分子的測(cè)試。 5.取經(jīng)Open-field-test試驗(yàn)篩選大鼠,并經(jīng)Morris水迷宮游泳迅速靈活的大鼠,隨機(jī)分為6組,即正常對(duì)照組、假手術(shù)組對(duì)照組、模型對(duì)照組、西藥對(duì)照組、柴胡疏肝散高低劑量組,每組l5只。先束縛法建立實(shí)驗(yàn)大鼠肝郁模型,接著在建立好的肝郁模型上往實(shí)驗(yàn)大鼠的海馬注射Aβ1-40創(chuàng)建肝郁型AD病證結(jié)合大鼠模型。觀測(cè)實(shí)驗(yàn)各組行為學(xué)指標(biāo)的變化。 結(jié)果 1.柴胡疏肝散含藥血清有7個(gè)特有蛋白表達(dá)峰,分別是M2440、M2455、M2602、M5781、M11544、M14285、M14983;安理申組特有的峰是14個(gè),分別是M1562、M2174、M2201、M2216、M2360、M2374、M2681、M2695、M2710、M2909、M3211、M3938、M14063、M15604。 2.柴胡疏肝散各單味中藥的成分和柴胡疏肝散水煎劑的成分相比存在著差異;實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜法進(jìn)行分析后,發(fā)現(xiàn)在血清和NG108-15細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)很多柴胡疏肝散水煎劑原型成分和移形成分。 3.實(shí)驗(yàn)研究中通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)Aβ1-40對(duì)NG108-15神經(jīng)細(xì)胞干預(yù)造模后,觀察各組NG108-15細(xì)胞的活性,再加入柴胡疏肝散含藥血清高中低劑量后,細(xì)胞的活性明顯好于模型組細(xì)胞的活性;西藥安理申組含藥血清和高劑量組柴胡疏肝散含藥血清對(duì)造模后的細(xì)胞的活性都好于其他各組,且兩者之間無(wú)明顯差異。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率,結(jié)果證明西藥安理申組含藥血清和高中低劑量組柴胡疏肝散含藥血清對(duì)造模后的細(xì)胞的活性都明顯好于模型組;高劑量組柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)細(xì)胞后,,細(xì)胞凋亡率明顯好于中低劑量柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)的細(xì)胞。聯(lián)合熒光染色也證明高劑量組柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率明顯好于中低劑量柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)的細(xì)胞。DNA瓊脂糖電泳以及本實(shí)驗(yàn)組既往的研究,觀察到柴胡疏肝散含藥血清對(duì)模型細(xì)胞干預(yù)處理后,GRP78和CHOP基因顯著表達(dá)下調(diào),而泛素(ubiquitin,Ub)基因顯著表達(dá)上調(diào)。 4.實(shí)驗(yàn)研究中通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)衣霉素(TM)對(duì)NG108-15神經(jīng)細(xì)胞干預(yù)造模后,觀察各組NG108-15細(xì)胞的活性,再加入柴胡疏肝散含藥血清高中低劑量后,細(xì)胞的活性明顯好于模型組細(xì)胞的活性;安理申組含藥血清和高劑量組柴胡疏肝散含藥血清對(duì)造模后的細(xì)胞的活性都好于其他各組,且兩者之間無(wú)明顯差異。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率,結(jié)果證明安理申組含藥血清和高中低劑量組柴胡疏肝散含藥血清對(duì)造模后的細(xì)胞的活性都明顯好于模型組;高劑量組柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率明顯好于中低劑量柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)的細(xì)胞。聯(lián)合熒光染色也證明高劑量組柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率明顯好于中低劑量柴胡疏肝散含藥血清干預(yù)保護(hù)的細(xì)胞。DNA瓊脂糖電泳以及本實(shí)驗(yàn)組既往的研究,觀察到柴胡疏肝散含藥血清對(duì)模型細(xì)胞干預(yù)處理后,GRP78和CHOP基因顯著表達(dá)下調(diào),而泛素(ubiquitin,Ub)基因顯著表達(dá)上調(diào)。 5.實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示,肝郁造模前、肝郁造模結(jié)束時(shí)以及老年性癡呆病證結(jié)合模型干預(yù)治療使實(shí)驗(yàn)各組大鼠的體重發(fā)生了變化,存在著差異。模型組大鼠體重和正常組大鼠體重相比,體重在各個(gè)階段都低于正常組,有顯著差異(P0.01);西藥組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和模型組大鼠體重相比,體重在各個(gè)階段都高于模型組,有顯著差異(P0.01);模型組和假手術(shù)組相比,大鼠體重明顯低于假手術(shù)組,有顯著差異(P0.01);中藥高劑量組和中藥低劑量組相比,大鼠體重明顯高于中藥低劑量組,有顯著差異(P0.01);西藥組和中藥高劑量組相比,大鼠體重?zé)o明顯差異(P0.05);肝郁造模前、肝郁造模結(jié)束后實(shí)驗(yàn)各組大鼠糖水偏好度發(fā)生了變化,存在著差異。正常組和模型組糖水偏好度相比,有顯著差異(P0.01);西藥組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和模型組大鼠糖水偏好度相比,有顯著差異(P0.01);中藥高劑量組和中藥低劑量組相比,大鼠糖水偏好度相比高于中藥低劑量組,有顯著差異(P0.01);西藥組和中藥高劑量組相比,大鼠糖水偏好度相比存在差異(P0.05);實(shí)驗(yàn)各組大鼠在逃避潛伏期相對(duì)比中,西藥對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和模型組相比,存在顯著差異(P0.01);正常組和模型組相比,存在顯著差異(P0.01);中藥高劑量組和中藥低劑量組相比,存在顯著差異(P0.01);西藥組和中藥高劑量組相比,未存在差異(P0.05);實(shí)驗(yàn)各組大鼠120S內(nèi)找到原平臺(tái)的記憶相對(duì)比中,包括初次找到原平臺(tái)的時(shí)間和穿越原平臺(tái)的次數(shù),西藥對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和模型組相比,存在顯著差異(P0.01);正常組和模型組相比,存在顯著差異(P0.01);中藥高劑量組和中藥低劑量組相比,存在顯著差異(P0.01);西藥組和中藥高劑量組相比,未存在差異(P0.05);Open-field-test水平活動(dòng)得分,正常組、西藥對(duì)照組與模型組相比較P0.01;中藥高劑量組和中藥低劑量組相比,P0.01;西藥組和中藥高劑量組相比,P0.05;Open-field-test垂直活動(dòng)得分,正常組、西藥對(duì)照組與模型組相比較P0.01;中藥高劑量組和中藥低劑量組相比,P0.01;西藥組和中藥高劑量組相比,P0.05;柴胡疏肝散水煎劑可以使單胺類腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA和5-HT含量增高。 結(jié)論 1.通過(guò)以上研究證明柴胡疏肝散含藥血清和安理申含藥血清飛行質(zhì)譜圖存在著顯著差異,說(shuō)明兩者之間對(duì)機(jī)體的藥理作用機(jī)理存在差異。 2.柴胡疏肝散含藥血清進(jìn)入NG108-15細(xì)胞內(nèi)部的藥物有效成分有多種,符合霰彈靶點(diǎn)理論多種有效成分作用于目標(biāo),而且作用的靶點(diǎn)有多個(gè),為進(jìn)一步探索阿爾茨海默病治療新靶點(diǎn)提供可能。 3.Aβ1-40成功誘導(dǎo)NG108-15神經(jīng)細(xì)胞成AD細(xì)胞模型;衣霉素成功誘導(dǎo)NG108-15神經(jīng)細(xì)胞成ERS細(xì)胞模型。 4.柴胡疏肝散含藥血清具有改善細(xì)胞ERS,激活UPP功能的作用。 5.海馬注射Aβ1-40結(jié)合束縛法可成功復(fù)制病證結(jié)合的肝郁型AD動(dòng)物模型; 6.柴胡疏肝散可明顯改善肝郁型AD大鼠模型抑郁癥狀,增強(qiáng)其學(xué)習(xí)記憶功能。 7.研究結(jié)果表明本理論的實(shí)驗(yàn)機(jī)理可能與疏肝解郁法可以明顯改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、增強(qiáng)泛素系統(tǒng)蛋白降解活性有關(guān),其作用涉及多個(gè)基因分子靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R285.5;R277.5
【目錄】:
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9 徐守軍,李欣,呂麗春,李雪華;鼻咽癌細(xì)胞株HNE-1蛋白質(zhì)二維電泳圖譜的建立[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年12期
10 沈新明,江培洲,黃華,李欣,姚開(kāi)泰;運(yùn)用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳和圖像軟件分析TPA處理NIH3T3細(xì)胞前后的蛋白質(zhì)表達(dá)譜差異[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年03期
【相似文獻(xiàn)】
中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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3 薛耀東;;柴胡疏肝散加味驅(qū)除膽道蟲體殘骸11例[J];黑龍江中醫(yī)藥;1991年05期
4 張杰;柴胡疏肝散加減治療頭痛160例[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;2001年02期
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6 吳素玲;加減柴胡疏肝散治療功能性消化不良48例[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2002年08期
7 王永健;柴胡疏肝散加味治療消化性潰瘍60例[J];實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床;2003年02期
8 徐金托;加味柴胡疏肝散治療神經(jīng)癥23例[J];光明中醫(yī);2004年06期
9 唐才東;柴胡疏肝散加減治療粘連性腸梗阻[J];四川中醫(yī);1984年03期
10 馬晶;柴胡疏肝散治療膽石癥的體會(huì)[J];甘肅中醫(yī);2000年04期
中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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5 許曉峰;張學(xué)進(jìn);王瀟;高瑞蘭;;茅莓及其含藥血清體內(nèi)外抑制K562白血病細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];2011年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)血液病學(xué)分會(huì)成立50周年慶典論文匯編[C];2011年
6 張進(jìn);黃進(jìn);徐志偉;;補(bǔ)腎填精藥促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的效應(yīng)及機(jī)制研究[A];第六屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論研究學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第二屆湖南省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)肝病專業(yè)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年
7 劉海全;秦佳佳;楊海韻;;淫羊藿含藥血清干預(yù)MSCs成脂分化過(guò)程中不同成脂誘導(dǎo)劑影響作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];第八屆博士生學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2010年
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10 胡廉;熊承良;;助孕一號(hào)含藥血清對(duì)弱精子癥患者精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)影響的體外研究[A];21世紀(jì)男科學(xué)——中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)男科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年
中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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7 王海燕;補(bǔ)腎益氣方對(duì)正常早孕期人滋養(yǎng)層細(xì)胞生長(zhǎng)與凋亡特性的調(diào)節(jié)[D];復(fù)旦大學(xué);2004年
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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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8 王海蘋;PMS肝氣逆證大鼠含藥血清對(duì)體外原代培養(yǎng)大鼠大腦皮層神經(jīng)元活力及5-HT1A受體影響[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2005年
9 陳圣麗;“益發(fā)”復(fù)方治療女性型脫發(fā)的臨床療效觀察及對(duì)體外培養(yǎng)SD大鼠毛乳頭細(xì)胞的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年
10 楊巍;淫羊藿對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];武漢體育學(xué)院;2007年
本文關(guān)鍵詞:基于“肝郁氣滯—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)聯(lián)”新假說(shuō)新靶點(diǎn)的老年性癡呆中藥干預(yù)研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號(hào):163654
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