本文選題：白假絲酵母菌　切入點(diǎn)：生物被膜　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：白假絲酵母菌(Candida albicans)是一種常見的人類致病真菌,據(jù)疾病控制中心(CDC)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,在口腔假絲酵母菌病發(fā)病率中,兒童的發(fā)病率為7%,艾滋病病人為31%,癌癥化療患者為20%;在健康女性中,假絲酵母菌陰道炎也十分常見,臨床表現(xiàn)多呈反復(fù)發(fā)作。由于白假絲酵母菌可以通過(guò)形成生物被膜以應(yīng)對(duì)多種復(fù)雜的環(huán)境,傳統(tǒng)的抗真菌藥物難以穿透從而導(dǎo)致白假絲酵母菌難以清除。白假絲酵母菌生物被膜的形成包括四個(gè)階段:粘附期,定植初期,細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)分泌期,成熟期。生物被膜是白假絲酵母菌重要的毒力因子之一,菌可借此粘附在宿主組織,假體,植入物(如導(dǎo)管,心臟瓣膜等)的表面,以利于白假絲酵母菌的定植。并且,生物被膜還能夠顯著增加白假絲酵母菌對(duì)傳統(tǒng)抗真菌藥物的耐藥性,與浮游細(xì)胞相比,生物被膜形態(tài)的白假絲酵母菌對(duì)唑類藥物的耐藥性升高約1000倍。因此,亟待尋找新的抗真菌藥物來(lái)應(yīng)對(duì)白假絲酵母菌感染。舒洛地爾(1-(4-異丙基苯硫基)-2-氨基-辛基丙醇)是一種鈣通道阻滯劑,能夠抗血管痙攣、抗血栓形成。有研究發(fā)現(xiàn),舒洛地爾在體外能夠抑制白假絲酵母菌的生長(zhǎng);還有研究證實(shí),舒洛地爾聯(lián)合氟康唑用藥,對(duì)新型隱球菌有抑制作用,而舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的作用,目前未見相關(guān)研究報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜形成及成熟生物被膜的抑制作用來(lái)評(píng)估其對(duì)生物被膜相關(guān)的白假絲酵母菌病的治療潛能。目的研究舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的抑制作用。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)舒洛地爾抑制生物被膜的效果及初步探究其抑制白假絲酵母菌生物被膜的作用機(jī)制;通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌陰道炎的治療效果,以期為淺表性白假絲酵母菌生物被膜感染的治療提供新策略。方法1.運(yùn)用XTT減低法測(cè)定舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌YEM30,臨床分離株LC3浮游細(xì)胞最小抑菌濃度(MIC_(80)),生物被膜抑制濃度(BIC_(80)),生物被膜根除濃度(BEC_(80))。2.通過(guò)時(shí)間殺菌曲線檢測(cè)舒洛地爾抑制白假絲酵母菌生物被膜形成、成熟期生物被膜的動(dòng)力學(xué)。3.運(yùn)用掃描電子顯微鏡觀察舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的形態(tài)影響。4.運(yùn)用透射電子顯微鏡觀察舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。5.運(yùn)用倒置顯微鏡觀察舒洛地爾在不同加藥時(shí)間對(duì)白假絲酵母菌生物被膜酵母相-菌絲相形態(tài)轉(zhuǎn)變影響。6.運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌菌絲生長(zhǎng)特異性相關(guān)基因的表達(dá)影響。7.構(gòu)建白假絲酵母菌陰道炎模型,評(píng)價(jià)舒洛地爾在體內(nèi)抗白假絲酵母菌生物被膜效果。結(jié)果1.舒洛地爾可抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成,并可破壞成熟的生物被膜。舒洛地爾對(duì)白假絲酵母菌YEM30,臨床分離株LC3 MIC_(80)為4 μg/mL,BIC_(80)為16 μg/mL,BEC_(80) 為 64 μg/mL。2.舒洛地爾抑制白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞的代謝活性呈濃度依賴性,隨著作用時(shí)間延長(zhǎng),濃度越高,抑制效果越好。3.舒洛地爾在體外使白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞皺縮,隨著作用時(shí)間延長(zhǎng),出芽細(xì)胞脫落,皺縮明顯。4.舒洛地爾在體外能夠破壞白假絲酵母菌生物被膜細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),使細(xì)胞膜皺縮,細(xì)胞壁斷裂,細(xì)胞內(nèi)電子密度降低,細(xì)胞內(nèi)容物滲出。5.舒洛地爾有效阻止白假絲酵母菌從酵母相向菌絲相轉(zhuǎn)變,舒洛地爾作用時(shí)間點(diǎn)越早,作用越明顯。6.舒洛地爾在體外使白假絲酵母菌菌絲生長(zhǎng)特異性相關(guān)基因HWP1,ALS3,ECE1的表達(dá)下調(diào)。7.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,與對(duì)照組相比,用藥組的菌落數(shù)顯著減少,炎癥減輕,舒洛地爾能有效治療白假絲酵母菌陰道炎。結(jié)論研究結(jié)果顯示,舒洛地爾在體內(nèi)外均能有效抑制白假絲酵母菌生物被膜。體外實(shí)驗(yàn)表明舒洛地爾不僅能破壞成熟生物被膜的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),而且通過(guò)下調(diào)菌絲特異性相關(guān)基因HWP1,ALS3,ECE1的表達(dá),阻斷菌絲相表達(dá),從而抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成。白假絲酵母菌陰道炎動(dòng)物模型的研究表明,用藥組的菌落數(shù)顯著減少,炎癥減輕。綜上所述,我們的研究表明舒洛地爾對(duì)于淺表性白假絲酵母菌生物被膜感染具有較理想的抑制作用,是一種潛在的、有價(jià)值的治療手段。
[Abstract]:Candida albicans (Candida albicans) is a common human pathogen, according to the Centers for Disease Control (CDC) statistics show that in the oral candidiasis incidence in children, the incidence of 7% AIDS patients, 31% patients with cancer chemotherapy was 20%; in healthy women, Candida yeast vaginitis is also very common, the clinical manifestations were recurrent. Due to Candida albicans can form biofilms in response to a variety of complex environment, the traditional antifungal drugs to penetrate causing Candida albicans is difficult to remove. Candida albicans biofilm formation includes four stages: adhesion. Early colonization, extracellular matrix material secretion period, mature period. The biofilm is one of the important virulence factors of Candida albicans, bacteria can take the adhesion in the host tissue, prosthesis, implants (such as catheters, heart valve and so on) the table The surface, in order to Candida albicans colonization and biofilm also significantly increases the resistance of Candida albicans to traditional antifungal drugs, compared with planktonic cells, drug resistance of Candida albicans by biological membrane morphology of azoles increased about 1000 times. Therefore, it is urgent to find to deal with white Candida infection of new antifungal agents. Suloctidil (1- (4- isopropyl phenylthio) -2- amino - octyl alcohol) is a calcium channel blocker, can anti vasospasm, thrombosis. Studies have found that suloctidil could inhibit Candida albicans in vitro and growth; study confirmed that suloctidil fluconazole treatment has inhibitory effect on Cryptococcus neoformans and suloctidil Candida albicans biofilm, currently no reports about this research. By detecting suloctidil Candida albicans Biological inhibition of membrane formation and mature biofilm to assess its effect on Candida albicans disease the therapeutic potential of biofilm related. Objective to study the inhibitory effect of suloctidil on Candida albicans biofilm. In vitro evaluation of suloctidil biofilm effect and explore its inhibition the mechanism of Candida albicans biofilm; in vivo evaluation of suloctidil Candida albicans vaginitis treatment, superficial provides a new strategy for the treatment of Candida albicans biofilms in order for infection. Methods 1. using XTT reduction method for the determination of suloctidil Candida albicans YEM30. Strain LC3 of planktonic cells minimal inhibitory concentration of clinical isolates (MIC_ (80)), biofilm inhibitory concentration (BIC_ (80)), biofilm eradication concentration (BEC_ (80).2.) by time killing curve detection to suppress white Luodier Shu Candida albicans biofilm formation, mature biofilm kinetics of.3. by scanning electron microscopy observation suloctidil on Candida albicans biofilm morphology by transmission electron microscope to observe the effect of.4. suloctidil on Candida albicans biofilm cell ultra microstructure effects by.5. inverted microscope suloctidil at different dosing time on Candida albicans biofilm - yeast phase of mycelial phase transformation effect of.6. using qRT-PCR technology to detect suloctidil Candida albicans mycelial growth of specific gene expression effect of.7. construction of Candida albicans vaginitis model, evaluate the suloctidil in vivo anti Candida albicans biofilm effect results 1.. Suloctidil can inhibit the formation of Candida albicans biofilms, and can damage the mature biofilm suloctidil with Candida. Albicans clinical isolates of LC3 YEM30, MIC_ (80) 4 g/mL, BIC_ (80) 16 g/mL, BEC_ (80) 64 g/mL.2. suloctidil inhibit Candida albicans biofilm metabolic activity of mesangial cells in a concentration dependent manner, with the extension of the time, the higher the concentration, inhibition the better.3. suloctidil in vitro to Candida albicans biofilm cell shrinkage, with the prolongation of time, budding cells shedding, obvious shrinkage.4. suloctidil can destroy the Candida albicans biofilm ultrastructure of cell membrane in vitro, the cell membrane shrinkage, cell wall fracture, the decrease of intracellular electron density.5., cell exudant suloctidil effectively prevent Candida albicans from yeast to hyphal phase transition, suloctidil time points earlier and more obvious effect of.6. suloctidil in vitro to Candida albicans hyphal growth specific genes related to H WP1, ALS3, ECE1 expression of.7. in animal experiments, compared with the control group, treatment group was significantly reduced the number of colonies, inflammation, suloctidil can be effective in the treatment of Candida vaginitis. Conclusion the results of the study showed that suloctidil could effectively inhibit Candida albicans biofilm in vitro and in vivo. In vitro experiments indicated that suloctidil can not only destroy the mature biofilm morphology and ultrastructure of the membrane, and through down-regulation of hypha specific genes HWP1, ALS3, ECE1 expression, blocking hyphal expression, thereby inhibiting the formation of Candida albicans biofilms. Research on Candida albicans vaginitis animal model showed that colony the number of treatment group was significantly reduced, reduced inflammation. In summary, our study shows that suloctidil for superficial Candida albicans biofilm can inhibit ideal membrane infection, is a kind of potential, Valuable treatment.

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 董成亞;馬小彤;;生物被膜分散方式的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)通報(bào);2005年06期

2 蔡蕓;趙鐵梅;王睿;;中國(guó)生物被膜相關(guān)研究文獻(xiàn)分析[J];中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志;2008年11期

3 劉彤;陳晶瑜;韓北忠;李春雷;;單核增生李斯特氏菌生物被膜的形成及控制[J];食品研究與開發(fā);2010年02期

4 葉楓,陳順存,鐘淑卿;呼吸道的生物被膜病[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2000年01期

5 郭生玉,李勝岐,劉勇,孫繼梅,周秀珍;銅綠假單胞菌感染豚鼠后生物被膜形成的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年04期

6 李鴻雁,夏前明,李福祥,全燕;呼吸道生物被膜病[J];西南軍醫(yī);2005年01期

7 王玎;李興祿;;生物被膜細(xì)菌的耐藥機(jī)制及其防治[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

8 張連波;高慶國(guó);張廣;;銅綠假單胞菌生物被膜研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2009年01期

9 梁歌宏;宋詩(shī)鐸;孫二琳;王哲;祁偉;;嗜麥芽窄食單胞菌生物被膜形成的體外抗菌活性研究[J];天津醫(yī)藥;2011年08期

10 金城;;李斯特菌生物被膜形成的調(diào)控[J];微生物學(xué)通報(bào);2011年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 盧中秋;趙光舉;;呼吸道細(xì)菌生物被膜感染研究進(jìn)展[A];2010全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 趙善良;;生物被膜與生物被膜病——呼吸系統(tǒng)致病細(xì)菌耐藥的又一個(gè)問題[A];結(jié)核與肺部疾病論文集[C];2006年

3 卜倩倩;伍勇;;糞腸球菌生物被膜形成的動(dòng)態(tài)觀察及早期相關(guān)基因的表達(dá)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 李聰然;錢皎;王睿;;銅綠假單胞菌生物被膜密度感知系統(tǒng)分子機(jī)制的研究進(jìn)展[A];創(chuàng)新藥物及新品種研究、開發(fā)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 李聰然;錢皎;王睿;;銅綠假單胞菌生物被膜密度感知系統(tǒng)分子機(jī)制的研究進(jìn)展[A];2006第六屆中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 蔡蕓;柴棟;梁蓓蓓;白楠;王睿;;細(xì)菌生物被膜研究文獻(xiàn)計(jì)量分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)呼吸道感染學(xué)術(shù)大會(huì)暨第一屆多學(xué)科抗感染治療學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

7 劉原;柯蕊;和平;潘雙;李亞明;趙玉杰;楊芬;;鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜與耐藥性及外排泵系統(tǒng)關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 金卉;周銳;康名松;羅銳;蔡旭旺;陳煥春;;副豬嗜血桿菌地方分離株和標(biāo)準(zhǔn)菌株的生物被膜形成研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

9 周穎;曲迪;侯征;薛小燕;羅曉星;;RIP衍生物抑制葡萄球菌生物被膜形成的試驗(yàn)研究[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

10 鄒彬彬;漆涌;伍勇;;糞腸球菌相關(guān)基因,QS-frs系統(tǒng)與生物被膜形成關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 北京朝陽(yáng)醫(yī)院 張洪玉教授;生物被膜病在作怪[N];健康報(bào);2000年

2 張洪玉;生物被膜病與慢性肺部感染[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

3 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 曾立明;細(xì)菌蓋“棉被”藥物難顯效[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

4 李聰然　錢皎;密度感知系統(tǒng)研究——為控制PA耐藥提供新思路[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

5 記者 董敬民;北京局科研工作再傳捷報(bào)[N];中國(guó)國(guó)門時(shí)報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 周光琪;Shewanella oneidensis呼吸作用對(duì)生物被膜形成的影響及其分子基礎(chǔ)研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 侯博;TolC在腸外致病性大腸桿菌中的生物學(xué)功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 陸秀紅;十字花科黑腐病菌轉(zhuǎn)錄后全局調(diào)控蛋白R(shí)smA_(Xcc)調(diào)控生物被膜形成的分子機(jī)理研究[D];廣西大學(xué);2014年

4 趙玉林;大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)S.suis體外生物被膜QS系統(tǒng)及毒力因子的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 劉磊;RovM和RovA調(diào)控鼠疫耶爾森氏菌生物被膜形成和毒力的分子機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

6 張連波;密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)銅綠假單胞菌致病力及生物被膜形成影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

7 崔冬清;氧濃度變化對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜生成的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

8 孔晉亮;氨溴索對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜作用的體外和體內(nèi)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 董洪燕;腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

10 王瑛;大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥對(duì)流感嗜血桿菌生物被膜的影響[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李穎佳;雙J管生物被膜細(xì)菌耐藥及其相關(guān)基因研究[D];中南大學(xué);2011年

2 黃衛(wèi)鋒;以群感效應(yīng)分子為靶點(diǎn)的魚腥草素鈉抗銅綠假單胞菌生物被膜機(jī)制的研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 馮凡;干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜體外抑菌效果及分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 張煜琛;基于群體感應(yīng)分析對(duì)蝦優(yōu)勢(shì)腐敗菌對(duì)副溶血弧菌毒力因子的影響[D];廣東海洋大學(xué);2015年

5 李曉博;豬源糞腸球菌Esp的原核表達(dá)及部分LPXTG基序樣物質(zhì)對(duì)生物被膜形成的影響[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 許晶;蒲公英水提物對(duì)豬鏈球菌生物被膜體外干預(yù)作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 黃駿;沙門菌生物被膜形成調(diào)控基因rpoE的鑒定及缺失突變株的生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

8 孫莉娜;遲鈍愛德華氏菌生物被膜狀態(tài)下耐藥相關(guān)基因與蛋白的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

9 劉彥蘭;食品加工環(huán)境中單核增生李斯特菌生物被膜菌群結(jié)構(gòu)分析[D];廣東工業(yè)大學(xué);2016年

10 梁晏瑞;金黃色葡萄球菌生物被膜形成特性及抑制清除方法研究[D];華南理工大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1596262