本文選題：胰島素樣生長(zhǎng)因子　切入點(diǎn)：力達(dá)霉素　出處：《中國(guó)藥學(xué)雜志》2016年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的制備一種由胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力達(dá)霉素(lidamycin,LDM)構(gòu)成的融合蛋白,并對(duì)其抗非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性進(jìn)行檢測(cè)。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并將其插入到p ET30a載體中,再將獲得的重組表達(dá)載體p ET30-ldp-igf轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),得到融合蛋白LDP-IGF。采用細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)和基于流式細(xì)胞術(shù)的親和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LDP-IGF蛋白與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的結(jié)合能力;力達(dá)霉素的發(fā)色團(tuán)(AE)與LDP-IGF蛋白在體外進(jìn)行分子組裝,獲得強(qiáng)化融合蛋白LDP-IGF-AE。四甲基偶氮唑藍(lán)法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LDP-IGF-AE對(duì)不同非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的體外殺傷活性,PI染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LDP-IGF-AE對(duì)細(xì)胞周期的影響以及Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)LDP-IGF-AE對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。結(jié)果經(jīng)過誘導(dǎo)LDP-IGF蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式表達(dá)。采用Ni~(2+)親和層析技術(shù)對(duì)包涵體蛋白進(jìn)行分離純化,經(jīng)過變性和分步透析復(fù)性后獲得了高純度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。親和實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LDP-IGF蛋白與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞具有高度的親和力。與AE分子進(jìn)行組裝后獲得的強(qiáng)化融合蛋白LDPIGF-AE對(duì)不同的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系均有非常強(qiáng)烈的殺傷活性,且其殺傷活性顯著高于力達(dá)霉素。細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,極低濃度的LDP-IGF-AE處理可使非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞阻滯于G_2/M期,并可顯著地誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。結(jié)論融合蛋白LDP-IGF-AE對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞有強(qiáng)大的體外抗腫瘤活性,具有發(fā)展成為非小細(xì)胞肺癌靶向治療劑的潛能。
[Abstract]:Objective to prepare a fusion protein composed of insulin-like growth factor (IGF-1) and lidamycinia (LDM-1), and to detect its activity in non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods the fusion protein gene ldp-igf was synthesized and inserted into p ET30a vector. The recombinant expression vector p ET30-ldp-igf was transformed into Escherichia coli for induction expression. The fusion protein LDP-IGF was obtained. The binding ability of LDP-IGF protein to non-small cell lung cancer cells was detected by cell immunofluorescence assay and affinity assay based on flow cytometry. The chromophore of lidamycin (Lidamycin) and LDP-IGF protein were assembled in vitro. The enhanced fusion protein LDP-IGF-AE.Tetramethylazolium blue assay was used to detect the cytotoxicity of LDP-IGF-AE to different non-small cell lung cancer cells in vitro. The effect of LDP-IGF-AE on cell cycle was detected by flow cytometry and Annexin V-FITC / Pi double staining method was used to detect the cell cycle. Results the LDP-IGF protein was expressed as inclusion body in E. coli. Ni~(2 affinity chromatography was used to isolate and purify the inclusion body protein. After denaturation and stepwise dialysis renaturation, high purity was obtained. The results of affinity assay showed that LDP-IGF protein had a high affinity with non-small cell lung cancer cells. The enhanced fusion protein LDPIGF-AE obtained by assembly with AE molecules on different non-small cell lung cancer cell lines. Have very strong killing activity, The results of cell cycle arrest and apoptosis test showed that very low concentration of LDP-IGF-AE could block NSCLC cells in G _ 2 / M phase. Conclusion the fusion protein LDP-IGF-AE has strong antitumor activity against non-small cell lung cancer cells in vitro and has the potential to become a target therapeutic agent for non-small cell lung cancer.
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;河南省分子診斷與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81202447)
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1571681