本文關(guān)鍵詞： 肝癌 二甲雙胍 姜黃素 侵襲轉(zhuǎn)移 血管生成　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景與目的肝細胞癌(肝癌)是一種很常見的惡性癌癥,盡管近些年來,肝癌的治療效果有所提高,但是肝癌的預后仍然很差,這很大程度地歸咎于肝癌患者確診時已處于中晚期、肝癌的高發(fā)生率以及高轉(zhuǎn)移性等因素。因此,臨床上肝癌治療的新策略更集中于尋找能夠抑制現(xiàn)有腫瘤的生長、抑制肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移以及血管生成,并且具有更低毒副反應(yīng)的藥物。二甲雙胍,一種具有很好耐受性的治療糖尿病的藥物,研究表明其能夠降低多種腫瘤的風險,其中包括肝癌。姜黃素是一種從姜黃的根莖中提取出來的多元酚類,具有多種藥理學的活性、較好的耐受性以及較低的毒性,并且具有較好的抗癌抗腫瘤活性。越來越多的體內(nèi)外研究表明飲食中植物化學的聯(lián)合療法相比于單一療法能夠更有效提高藥物的細胞毒性,抑制腫瘤細胞的生長。本課題從細胞和動物兩個層次觀察研究二甲雙胍聯(lián)合姜黃素對肝癌HepG2細胞的增殖、調(diào)亡、侵襲轉(zhuǎn)移、血管生成以及腫瘤組織生長的協(xié)同抑制作用,并且初步探討了其潛在的分子機制。實驗方法和結(jié)果實驗方法:采用MTT法、CCK-8法、克隆形成實驗以及裸鼠移植瘤模型檢測二甲雙胍和姜黃素合用對肝癌HepG2細胞增殖以及腫瘤生長的影響。二甲雙胍和姜黃素合用對HepG2肝癌細胞作用后,采用Hoechst 33342染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測HepG2細胞凋亡的比例,JC-1染色法測定HepG2細胞線粒體膜的電位,PI染色法測定HepG2細胞的周期阻滯情況。采用劃痕實驗和Transwell實驗測定二甲雙胍和姜黃素合用對HepG2細胞侵襲和遷移能力的影響。采用明膠酶譜實驗和Western blot實驗測定兩藥合用對基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9/2蛋白活性及表達的影響。采用劃痕實驗和小管形成實驗檢測二甲雙胍和姜黃素對HUVEC細胞遷移以及血管形成的作用。實驗中所有相關(guān)蛋白表達的變化均采用Western blot實驗檢測。實驗結(jié)果:二甲雙胍能夠分別在體內(nèi)、體外提高姜黃素抑制肝癌HepG2細胞增殖以及腫瘤生長的抗腫瘤活性,并且無明顯的毒副反應(yīng)。二甲雙胍和姜黃素聯(lián)合使用能夠通過激活p53,進而增加Bax/Bcl-2的比率以及cleaved-PARP的表達,從而引起HepG2細胞線粒體通路相關(guān)的細胞凋亡。二甲雙胍和姜黃素合用能夠下調(diào)MMP9和MMP2蛋白活性及表達,進而阻止HepG2細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。兩藥合用還可以抑制HUVEC細胞遷移以及血管形成,從而阻止腫瘤細胞的血管生成能力。二甲雙胍和姜黃素共處理能夠抑制PTEN/PI3K/Akt/mTOR信號通路,阻止NF-κB的入核,通過抑制STAT3介導的轉(zhuǎn)錄減少VEGF的表達,從而抑制HepG2細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移以及血管生成能力,這些細胞蛋白水平的實驗結(jié)果進一步在動物瘤塊組織中得到確證。實驗結(jié)論二甲雙胍和姜黃素聯(lián)合使用能夠在體內(nèi)和體外協(xié)同抑制肝癌的增殖能力、侵襲遷移及血管生成的作用。二甲雙胍和姜黃素共處理不僅能夠通過活化線粒體通路,從而引起細胞的凋亡,也可以通過下調(diào)MMP2和MMP9的水平以及血管生成相關(guān)因子VEGF、VEGFR2的表達,從而抑制HepG2細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成能力。進一步探討其分子機制,二甲雙胍和姜黃素通過上調(diào)PTEN、P53,抑制PI3K/Akt/mTOR/NF-κB和EGFR/STAT3信號傳導通路發(fā)揮以上作用。因此,二甲雙胍和姜黃素的聯(lián)合使用將為肝癌的治療提供一個很有前景的治療策略。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【參考文獻】

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本文編號：1498509