本文關鍵詞： 聚賴氨酸樹枝狀分子 納豆激酶 溶血栓 血栓靶向 磁性納米顆粒 體外溶栓　出處：《蘭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：納豆激酶(NK)作為一種新型的溶栓劑,因具備直接溶栓、激活體內細胞產生尿激酶和內源組織型纖溶酶原激活劑等優(yōu)勢引起了研究者們的高度重視。然而,NK作為蛋白酶類藥物仍存在一些缺點,如容易受到外部環(huán)境的影響、對溫度和pH的變化較為敏感。與傳統(tǒng)的溶栓治療相比,利用藥物載體包埋溶栓藥物已經吸引了研究者們的注意。經藥物載體包埋NK之后,能夠更好地保護NK不失活,并提高其耐溫度和pH的穩(wěn)定性。聚賴氨酸樹枝狀分子具有可控的尺寸、可功能化的表面官能團、良好的水溶性、生物降解性及生物相容性,被認為是一種理想的藥物載體。因此,本學位論文使用賴氨酸為主要原料,制備了一系列不同代數(shù)的聚賴氨酸樹枝狀分子,研究了其作為藥物載體包埋NK在溶血栓方面的性質。為了實現(xiàn)靶向性溶血栓的目的,引入了磁靶向和血栓部位靶向,前者是借助外部磁場達到靶向血栓部位的目的;后者是利用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD肽)與血小板GP IIb/IIIa受體特異性結合的能力,從而具備血栓靶向性。本學位論文主要包括以下兩個方面:1.通過發(fā)散-收斂法制備了二代、三代和四代聚賴氨酸樹枝狀分子(PLLD Gn),使其與溶栓藥物NK復配形成納米復合物。當NK與PLLD G4的摩爾比為1:30時,形成的NK/PLLD納米復合物具有最高的NK酶活(高達117%)。熒光光譜研究結果表明,NK與PLLD之間的作用力為氫鍵作用和范德華力,并且NK/PLLD納米復合物具有較好的耐溫度和p H的穩(wěn)定性。體外溶栓研究結果表明,在12 h內NK/PLLD納米復合物溶栓率達到50%,與游離NK相比,NK/PLLD納米復合物能起到緩釋NK的作用。溶血實驗和MTT實驗研究結果表明,PLLD具有更低的細胞毒性和良好的生物相容性。2.使用共沉淀法制備了Fe_3O_4磁性納米顆粒,用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)修飾后,再用三代聚賴氨酸樹枝狀分子(PLLD)修飾,最后用RGD修飾得到新型磁性納米顆粒Fe_3O_4-PLLD-RGD,再通過離子吸附作用將NK固定到Fe_3O_4-PLLD-RGD表面,得到Fe_3O_4-PLLD-RGD/NK。體外靶向研究結果表明,經RGD修飾的磁性納米顆粒具有好的血栓靶向能力和磁靶向能力。體外溶栓研究結果表明,在2.5 h內,Fe_3O_4-PLLD-RGD/NK磁性納米顆粒溶栓率達到50%;在5.5 h內,游離NK和Fe_3O_4-PLLD/NK磁性納米顆粒的溶栓率均達到50%。以上結果表明,Fe_3O_4-PLLD-RGD/NK磁性納米顆粒具有良好的血栓靶向能力和快速溶栓能力。溶血實驗和MTT實驗研究結果表明,Fe_3O_4-PLLD-RGD具有更低的細胞毒性和良好的生物相容性。
[Abstract]:As a new type of thrombolytic agent, nattokinase (NKK) has attracted great attention due to its advantages of direct thrombolysis, activation of urokinase and endogenous tissue plasminogen activator. NK as a protease drug still has some disadvantages, such as easy to be affected by external environment, sensitive to temperature and pH changes, compared with traditional thrombolytic therapy. The use of drug carrier embedded thrombolytic drugs has attracted the attention of researchers. After the drug carrier embedding NK, it can better protect NK from inactivation. The poly (lysine) dendrimer has controllable size, functional surface functional group, good water solubility, biodegradability and biocompatibility. It is considered to be an ideal drug carrier. Therefore, a series of dendritic molecules with different algebras have been prepared using lysine as the main raw material in this dissertation. In order to achieve the purpose of targeted thrombolytic thrombus, magnetic targeting and thrombus site targeting were introduced. The former uses external magnetic field to reach the target thrombus. The latter is the ability to specifically bind to platelet GP IIb/IIIa receptor using arginine-glycine-aspartic acid peptide. This dissertation mainly includes the following two aspects: 1.The second generation, the third generation and the fourth generation of Poly (lysine) dendrimer (PLLD Gnn) were prepared by divergen-convergence method. When the molar ratio of NK to PLLD G4 is 1:30. The formed NK/PLLD nanocomposites have the highest NK enzyme activity (up to 1177.The fluorescence spectra show that the interaction force between NK and PLLD is hydrogen bond and van der Waals force). The results of in vitro thrombolytic study showed that the thrombolysis rate of NK/PLLD nanocomposites reached 50% within 12 hours. Compared with free NK, NK-P / PLLD nanocomposites can play the role of sustained-release NK. The results of hemolysis experiment and MTT experiment show that NK-P / PLLD nanocomposite can release NK slowly. PLLD has lower cytotoxicity and better biocompatibility. 2. Fe_3O_4 magnetic nanoparticles were prepared by coprecipitation method. After modified with 3-aminopropyl triethoxy silane (APTES), then modified with three generation poly-lysine dendrimer (PLLDD). Finally, the novel magnetic nanoparticles Fe3O4-TiPLLD-RGDwere prepared by RGD modification, and NK was immobilized to the Fe_3O_4-PLLD-RGD surface by ion adsorption. Fe3O4-PLLD-RGD / NK. the results of in vitro targeting study showed that Fe3O4-PLLD-RGD- NK. The magnetic nanoparticles modified by RGD had good thrombus targeting ability and magnetic targeting ability. The results of thrombolysis in vitro showed that the thrombolytic activity was within 2.5 h. The thrombolysis rate of Fe_3O_4-PLLD-RGD/NK magnetic nanoparticles was 50%. Within 5.5 h, the thrombolysis rates of both free NK and Fe_3O_4-PLLD/NK magnetic nanoparticles were 50%. Fe_3O_4-PLLD-RGD/NK magnetic nanoparticles have good thrombolytic targeting ability and rapid thrombolytic ability. The results of hemolysis experiment and MTT experiment show that. Fe_3O_4-PLLD-RGD has lower cytotoxicity and good biocompatibility.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R943;R96

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