本文關(guān)鍵詞： CB基因 HEK細(xì)胞 Ca Ski細(xì)胞 細(xì)胞凋亡　出處：《中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào)》2015年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建大鼠CB1(r CB1)基因真核表達(dá)載體,檢測r CB1基因在細(xì)胞中的表達(dá),研究r CB1對人宮頸癌Ca Ski細(xì)胞凋亡的影響。方法從大鼠腦組織中提取總RNA,RT-PCR擴(kuò)增r CB1基因,通過酶切、純化、連接PCR純化產(chǎn)物與p CDNA 3.1(+)質(zhì)粒,構(gòu)建pc DNA3.1(+)-r CB1。脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染到HEK293和Ca Ski細(xì)胞,Western blot及細(xì)胞免疫熒光聯(lián)合激光掃描共聚焦方法檢測r CB1的表達(dá)及定位,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,Western blot與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測r CB1、Bcl-2、Bax、Bad表達(dá)。結(jié)果酶切重組質(zhì)粒獲得5300 bp的載體片段和1500 bp的目的片段,測序結(jié)果和r CB1基因序列(NM_012784.4)一致。轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞后,r CB1在HEK293細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。轉(zhuǎn)染Ca Ski細(xì)胞后,r CB1使細(xì)胞凋亡率增加(P0.05);r CB1基因上調(diào)Bax、Bad的表達(dá),同時(shí)抑制Bcl-2的表達(dá),與空白組比較,其差異具有顯著性(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了pc DNA3.1(+)-r CB1真核表達(dá)載體,r CB1表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì),r CB1可以明顯促進(jìn)宮頸癌Ca Ski細(xì)胞凋亡,其機(jī)制是上調(diào)Bax、Bad和抑制Bcl-2表達(dá)。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression vector of rat CB1(r CB1 gene and detect the expression of r CB1 gene in cells. To study the effect of r CB1 on apoptosis of human cervical cancer Ca Ski cells. Methods the r CB1 gene was amplified by RT-PCR from rat brain tissue and purified by enzyme digestion. The purified product of PCR was ligated with p CDNA 3.1 () plasmid. PcDNA3.1 was constructed and transfected into HEK293 and Ca Ski cells by liposome method. The expression and localization of r CB1 were detected by Western blot and immunofluorescence combined with laser scanning confocal method, and the apoptosis rate was detected by flow cytometry. Western blot and real-time fluorescence quantitative PCR were used to detect rCB1, Bcl-2 and Bax. Results 5300bp vector fragment and 1500bp target fragment were obtained by restriction endonuclease digestion. The results of sequencing were consistent with the sequence of r CB1 gene nmsp. 012784.4). After transfection of HEK293 cells. R CB1 was expressed in the cell membrane and cytoplasm of HEK293 cells. After transfection of Ca Ski cells, r CB1 increased the apoptosis rate of HEK293 cells. R CB1 gene upregulated the expression of Baxon Bad and inhibited the expression of Bcl-2, compared with the control group. Conclusion the eukaryotic expression vector of pc DNA3.1 (pc-r CB1) was successfully constructed and expressed in cell membrane and cytoplasm. R CB1 can obviously promote apoptosis of Ca Ski cells in cervical cancer by up-regulating Bad and inhibiting Bcl-2 expression.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心;重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校;重慶市嚙齒類實(shí)驗(yàn)動物工程技術(shù)研究中心;
【基金】：重慶市教委自然科學(xué)基金項(xiàng)目(KJ111802) 重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(2012-1-096) 重慶市高等教育教學(xué)改革研究重點(diǎn)項(xiàng)目(132128、133309) 重慶萬州區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(201203055) 重慶市應(yīng)用開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(cstc2013yykf C10005)
【分類號】：R965
【正文快照】： 。3.重慶市嚙齒類實(shí)驗(yàn)動物工程技術(shù)研究中心,重慶400016)ting the pc DNA3.1(+)-r CB1.The result of sequencing was in agreement with the sequence of r CB1 gene(NM_大麻素是從印度大麻(Cannabis sativa)里發(fā)現(xiàn)的一組萜酚類化合物,存在于動物神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)里[1,2]。

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1452446