本文關鍵詞：三對苯丙素類同分異構體對HepG2細胞系代謝同工酶CYP3A4、1A1酶表達的研究　出處：《寧夏醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：化合物結構是決定藥效發(fā)揮的最本質基礎，本實驗選取三對苯丙素類同分異構體補骨脂素、異補骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、阿魏酸和異阿魏酸，討論其結構變化對HepG2細胞系藥物代謝同工酶CYP3A4、1A1調控的影響，并闡述其相關機制，，從而為臨床中草藥的安全合理使用提供理論基礎。 方法： 1.采用MTT比色法測定六種藥物作用48h后對體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞增殖的影響，計算IC50，篩選有效濃度。 2.采用流式細胞術測定六種藥物對HepG2細胞周期的影響。 3.通過實時熒光定量PCR技術測定經(jīng)六種藥物處理細胞后HepG2的CYP3A4和CYP1A1的mRNA的表達變化。 4.用免疫熒光法（IF）和蛋白免疫印跡法（WB）定位及定量測定六種藥物對HepG2中細胞CYP3A4蛋白酶表達的影響。 結果： 1.給藥48h，六種藥物在七個濃度（6.25~200μg/mL）作用下對HepG2細胞系增殖均有抑制作用，并有明顯的劑量依賴關系。補骨脂素、異補骨脂素、阿魏酸和異阿魏酸均抑制細胞增殖于G2-M期，而歐前胡素和異歐前胡素阻止細胞增殖于G2-M期和S期。 2.六種藥物均是CYP3A4mRNA的抑制劑。異補骨脂素的抑制作用比補骨脂素更強；歐前胡素在高中低三個濃度時均為CYP3A4mRNA的弱抑制劑，異歐前胡素的抑制能力明顯強于歐前胡素；異阿魏酸對CYP3A4mRNA的抑制作用略強于阿魏酸。 3.六種藥物均是CYP1A1mRNA的抑制劑。補骨脂素對CYP1A1mRNA的抑制略比異補骨脂素強；異歐前胡素在低濃度時（25、50μg/mL）對1A1mRNA的抑制作用明顯強于歐前胡素，而在高濃度時（100μg/mL）兩藥作用程度無太大區(qū)別；異阿魏酸在高中低三個濃度時對1A1mRNA的抑制作用明顯強于阿魏酸。 4. IF和Western Blot實驗證實CYP3A4蛋白主要存在于細胞漿中，六種藥物作用后的CYP3A4蛋白表達明顯降低。 結論: 1.六種藥物均為CYP3A4和CYP1A1酶的抑制劑，在臨床藥物合用時應注意因藥物積蓄毒性而造成的不良反應。 2.六種藥物均阻止了細胞mRNA和蛋白質的合成進而抑制腫瘤細胞HepG2增殖，且歐前胡素和異歐前胡素同時減弱了DNA的合成從而抑制細胞生長。 3.補骨脂素、異補骨脂素、歐前胡素和異歐前胡素此四者同屬呋喃香豆素類化合物，發(fā)現(xiàn)呋喃環(huán)結構變化是導致此四者對CYP3A4和CYP1A1的mRNA和蛋白差異較大的主要原因；苯環(huán)上的酚羥基異構是阿魏酸和異阿魏酸對CYP3A4和CYP1A1酶具有不同抑制強度的原因。
[Abstract]:Objective: the compound structure is the most essential foundation decided to take effect, this experiment selects three of phenylpropanoid similar isomers of psoralen, isopsoralen, imperatorin, isoimperatorin, ferulic acid and isoferulic acid, discusses its structure changes effect on HepG2 cell line of drug metabolism isoenzyme CYP3A4,1A1 regulation, and discusses the related mechanism, thus providing a theoretical basis for clinical rational use of Chinese herbal medicine.
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本文編號：1438757