本文關(guān)鍵詞：3,4-二羥基苯甲酸甲酯抗SH-SY5Y細胞氧化損傷作用及其機制　出處：《暨南大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：實驗?zāi)康?研究3,4-二羥基苯甲酸甲酯(methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB)抗過氧化氫叔丁醇(t-butylhydroperoxide,TBHP)所致SH-SY5Y細胞氧化損傷的作用,并對其作用機制進行初步探討。實驗方法:培養(yǎng)SH-SY5Y細胞,用不同濃度的TBHP作用24h,確定建立細胞氧化損傷模型所需的TBHP濃度。分別用不同濃度的MDHB及陽性對照藥N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)預(yù)處理細胞4 h,繼續(xù)使用TBHP處理24 h。MTT法、LDH法檢測細胞活性,初步確定對該模型有效的藥物濃度(2μM、4μM、8μM)。后續(xù)實驗分組為:空白對照組、溶劑+TBHP組、2μM MDHB+TBHP處理組、4μM MDHB+TBHP處理組、8μM MDHB+TBHP處理組、100μM NAC+TBHP處理組。顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化,采用Annexin V/PI雙染后用流式細胞儀計算凋亡細胞比率,利用熒光探針2',7'-二氯熒光素雙醋酸酯(2',7'-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)檢測細胞內(nèi)的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,用試劑盒檢測谷胱甘肽過氧化氫酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)檢測DNA氧化損傷標志物8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)含量,采用Western blot法檢測MDHB對SH-SY5Y細胞Bcl-2、Bax、caspase 3、Nrf2、p-Akt和Akt蛋白表達的影響。實驗結(jié)果:2μM、4μM、8μM的MDHB預(yù)處理均能夠顯著提高氧化損傷狀態(tài)下SH-SY5Y細胞的存活率(P0.01)。同時MDHB能夠降低細胞凋亡率(P0.01)、清除自由基(P0.01)、提高細胞GSH-Px活性(P0.01)、SOD活性(P0.05)和降低細胞培養(yǎng)上清中8-OHdG含量(P0.01)。Western blot結(jié)果表明,MDHB可能是通過提高抗凋亡蛋白Bcl-2與促凋亡蛋白Bax的比例(P0.01),抑制caspase 3蛋白的激活(P0.01),提高抗氧化蛋白Nrf2的表達(P0.01),并上調(diào)Akt蛋白磷酸化水平(P0.05)來發(fā)揮抗氧化損傷和抗凋亡作用的。結(jié)論:MDHB能夠拮抗TBHP引起的SH-SY5Y細胞氧化損傷,其機制可能與減少ROS產(chǎn)生、減少DNA氧化損傷、激活PI3K/Akt-Nrf2信號通路,提高Bcl2/Bax比例,抑制cleaved caspsae-3凋亡通路有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To study the effect of methyl 3,4 - dihydroxybenzoate ( MDHB ) on oxidative damage of SH - SYY cells induced by tert - butyl hydroperoxide ( TBHP ) . Methods : To study the effect of TBHP on the oxidative damage of SH - SYY cells induced by tert - butyl hydroperoxide ( TBHP ) . The effects of MDHB on the expression of Bcl - 2 , Bax , caspase 3 , Nrf2 , p - activity in the cells were measured by Western blot . The results showed that MDHB could decrease the apoptosis rate ( P0.01 ) , eliminate free radicals ( P0.01 ) , improve the activity of GSH - Px ( P0.01 ) , and inhibit the activation of caspase 3 protein ( P0.01 ) . Conclusion : MDHB can inhibit the oxidative damage induced by TBHP . The mechanism may be related to reducing the production of ROS , reducing DNA oxidative damage , activating the signal pathway of PI3 - 3 - Nrf2 , increasing the ratio of Bcl - 2 / Bax , and inhibiting the apoptosis pathway of caspase - 3 .

【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：1416896