本文關(guān)鍵詞：鈣調(diào)磷酸酶抑制劑環(huán)孢菌素A增強(qiáng)氟康唑抗生物膜型白念珠菌的研究

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【摘要】：目的本研究旨在評(píng)價(jià)鈣調(diào)磷酸酶抑制劑環(huán)孢菌素A(cyclosporine,CSA)對(duì)氟康唑抗生物膜型白念珠菌的增敏作用,并初步探討其增敏作用的可能機(jī)制。方法收集2014年1-12月從寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床血流感染標(biāo)本中分離出的白念珠菌,采用法國(guó)梅里埃公司全自動(dòng)微生物分析儀(VITEK 2 COMPACT)將微生物鑒定到“種”水平。選取從臨床血流感染分離的強(qiáng)產(chǎn)膜菌株CA NX05作為實(shí)驗(yàn)菌株,構(gòu)建體外生物膜模型,并分析其生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)情況,明確菌株生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期;采用熒光染色法定性觀察生物膜的生長(zhǎng)及形態(tài),XTT法測(cè)定藥物對(duì)生物膜型白念珠菌細(xì)胞活性的影響,并利用實(shí)時(shí)熒光定量q RT-PCR檢測(cè)耐藥及粘附相關(guān)基因ALS3、HWP1、CDR1、MDR及ERG11在m RNA表達(dá)水平的變化;利用水-烴兩相分離實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞表面相對(duì)疏水性的影響;利用流式細(xì)胞儀測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化的影響。結(jié)果2014年1-12月從寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床血流感染標(biāo)本中共分離出白念珠菌24株,其中4株強(qiáng)產(chǎn)膜菌株、6株中產(chǎn)膜菌株、14株弱產(chǎn)膜菌株,并將其中從臨床血流感染中分離獲得的強(qiáng)產(chǎn)生物膜型白念珠菌,命名為CA NX05(OD值最大);用顯微鏡觀察結(jié)晶紫染色后的弱產(chǎn)膜株,發(fā)現(xiàn)大部分細(xì)胞以酵母樣粘附于培養(yǎng)板底部,并且形成微菌落,只有少量成菌絲樣細(xì)胞生長(zhǎng)。觀察CA NX05強(qiáng)產(chǎn)膜株時(shí)發(fā)現(xiàn),大部分細(xì)胞是以菌絲樣生長(zhǎng),菌絲相互交錯(cuò)生長(zhǎng),依稀能看見基底的酵母樣細(xì)胞。動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明4-18h是菌株生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期,當(dāng)培養(yǎng)到24-48h時(shí)處于穩(wěn)定期。根據(jù)棋盤法藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,單用CSA對(duì)白念珠菌生物膜的抑制率很低,當(dāng)濃度達(dá)到300μg/ml時(shí)抑制率仍小于10%。當(dāng)單用FLC時(shí),雖然抑制率有所升高,但是當(dāng)濃度達(dá)到1024μg/ml時(shí),真菌生長(zhǎng)抑制率小于20%,與無處理組相比,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。然而當(dāng)用濃度為75μg/ml的CSA與FLC聯(lián)合使用時(shí),FLC的MIC50為32μg/ml,相對(duì)于單用藥降低了32倍之多,與單用FLC相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。q RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示當(dāng)FLC和CSA聯(lián)合使用時(shí)其耐藥泵基因和粘附相關(guān)基因ALS3、MDR、CDR1、ERG11、HWP1的表達(dá)量與它們單獨(dú)作用相比明顯降低(P0.05);利用水-烴兩相分離實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞表面相對(duì)疏水性時(shí),發(fā)現(xiàn)當(dāng)加入鈣調(diào)磷酸酶抑制劑后與單用氟康唑相比,其疏水性相對(duì)降低;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其胞內(nèi)鈣離子的濃度變化時(shí),發(fā)現(xiàn)氟康唑加入以后,與沒有加入藥物相比其細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化很小,而加入抑制劑環(huán)孢菌素A以后隨時(shí)間的增加其胞內(nèi)鈣離子逐漸增多,差異有顯著性意義(P0.05)。結(jié)論1.白念珠菌在細(xì)胞培養(yǎng)板上能夠形成典型的生物膜,通過熒光顯微鏡可以看到白念珠菌生物膜隨著時(shí)間的增長(zhǎng)其細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞外多糖基質(zhì)也逐漸增多,48h以后能夠形成典型的生物膜結(jié)構(gòu)。2.生物膜型白念珠菌隨著其不斷地成熟對(duì)氟康唑的耐藥性不斷地增強(qiáng),而加入鈣調(diào)磷酸酶抑制劑環(huán)孢菌素A能夠增強(qiáng)氟康唑抗生物膜型白念珠菌的敏感性。3.鈣調(diào)磷酸酶抑制劑環(huán)孢菌素A對(duì)氟康唑抗生物膜型白念珠菌的增敏作用機(jī)制可能與降低耐藥及粘附相關(guān)基因的表達(dá)量、降低細(xì)胞表面的疏水性及增加胞內(nèi)鈣離子濃度有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：白念珠菌 生物膜 鈣調(diào)磷酸酶 氟康唑 耐藥基因
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮略語9-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-29
• 1.材料14-15
• 2.方法15-28
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-29
• 結(jié)果29-40
• 討論40-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 文獻(xiàn)綜述54-67
• 綜述參考文獻(xiàn)61-67
• 致謝67-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文68-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69

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本文編號(hào)：1114797