發(fā)布時(shí)間：2017-10-18 19:07

  本文關(guān)鍵詞：多肽—脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及功能研究

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【摘要】：脂質(zhì)體模擬天然的生物膜結(jié)構(gòu),具有優(yōu)越的生物相容性,成為藥物運(yùn)輸?shù)牧己幂d體。隨著脂質(zhì)體的發(fā)展,各種模擬體內(nèi)天然囊泡結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)納米粒子受到人們的關(guān)注。本文首先介紹了傳統(tǒng)脂質(zhì)體的修飾和存在的缺陷,進(jìn)一步對(duì)天然存在的脂質(zhì)囊泡結(jié)構(gòu)脂蛋白進(jìn)行了詳細(xì)描述,并且介紹了模擬脂蛋白的多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及應(yīng)用。然后本文詳細(xì)介紹了在多肽-脂質(zhì)納米粒子構(gòu)建和功能研究方面的主要工作:(1)通過對(duì)多肽進(jìn)行二價(jià)化改造,構(gòu)建以整合方式實(shí)現(xiàn)納米粒子形成、表面功能化和疏水化合物包裹的多肽-脂質(zhì)納米粒子組裝平臺(tái);(2)選取陽(yáng)離子雙親性多肽,研究脂質(zhì)納米粒子的形成以及對(duì)多肽性質(zhì)的優(yōu)化。最后,對(duì)工作內(nèi)容進(jìn)行了整體總結(jié)和展望。以下是本論文的兩部分主要研究工作的簡(jiǎn)要介紹:1.多功能多肽-脂質(zhì)納米粒子的組裝及細(xì)胞靶向輸送本研究構(gòu)建了一種多肽-脂質(zhì)納米粒子平臺(tái),以整合的方式實(shí)現(xiàn)納米粒子的組裝、表面功能化和疏水性藥物的裝載。用于組裝脂質(zhì)納米粒子的新型多肽由兩條α螺旋多肽組成,并且通過環(huán)狀結(jié)構(gòu)進(jìn)行連接,形成ALA結(jié)構(gòu)。這種二價(jià)化的結(jié)構(gòu)多肽具有更好的雙螺旋結(jié)構(gòu)和更強(qiáng)的脂質(zhì)包裝能力,并且對(duì)疏水性分子(Ir(ppy)2-DIP)具有更穩(wěn)定的裝載能力。在環(huán)狀結(jié)構(gòu)中引入五個(gè)組氨酸,構(gòu)建的納米粒子可以與Ni柱相互作用,說明環(huán)狀結(jié)構(gòu)展示于脂質(zhì)納米粒子的表面,可以行使功能。接下來,引入具有整合素靶向功能的RGD序列,構(gòu)建的脂質(zhì)納米粒子將Ir(ppy)2-DIP化合物選擇性的輸送進(jìn)整合素高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞,大大降低對(duì)非腫瘤細(xì)胞的毒性作用。進(jìn)一步研究證明,完整的環(huán)狀結(jié)構(gòu)保證RGD序列的充分暴露和靶向功能的行使。2.陽(yáng)離子雙親性多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及細(xì)胞毒性和體外穩(wěn)定性的研究我們選取陽(yáng)離子雙親性多肽R多肽(RLARLLRRLARWLR)進(jìn)行多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建。R多肽可以快速與脂質(zhì)乳濁液相互作用促進(jìn)納米粒子的形成,并且疏水性部分嵌入到脂質(zhì)納米粒子的疏水核心,引起色氨酸熒光光譜發(fā)生藍(lán)移。構(gòu)建的R-LNP(R多肽-脂質(zhì)納米粒子)的粒徑為14.7±0.1 nm、zeta電位為17.8 mV,單分散性好,粒徑均一。進(jìn)一步通過MTT實(shí)驗(yàn)研究R-LNP對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,實(shí)驗(yàn)證明R-LNP對(duì)A549和MCF-7細(xì)胞的半抑制濃度為5.93±0.75μM、4.36±0.40μM,保留R多肽細(xì)胞毒性作用。最后,通過UPLC分析得知,R-LNP大大增強(qiáng)了R多肽對(duì)糜蛋白酶和胰蛋白酶的抗性,提高了多肽的穩(wěn)定性。
【關(guān)鍵詞】：脂質(zhì)體 脂蛋白 多肽-脂質(zhì)納米粒子 靶向 陽(yáng)離子雙親性多肽
【學(xué)位授予單位】：上海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R94
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 緒論12-36
• 1.1 傳統(tǒng)脂質(zhì)體表面功能化簡(jiǎn)介12-18
• 1.1.1 多聚物的修飾12-16
• 1.1.2 靶向分子的修飾16-18
• 1.2 天然脂蛋白的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用18-25
• 1.2.1 低密度脂蛋白的結(jié)構(gòu)和應(yīng)用19-21
• 1.2.2 高密度脂蛋白的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用21-25
• 1.3 載脂蛋白的結(jié)構(gòu)及其模擬肽25-29
• 1.3.1 Apo B-100的結(jié)構(gòu)及其模擬肽25-27
• 1.3.2 Apo A-I的結(jié)構(gòu)及其模擬肽27-29
• 1.4 多肽-脂質(zhì)納米粒子（PLNP）的構(gòu)建及應(yīng)用29-34
• 1.4.1 LDL型多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及應(yīng)用30
• 1.4.2 HDL型多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及應(yīng)用30-34
• 1.5 課題研究的目的及研究?jī)?nèi)容34-36
• 第二章 多功能多肽-脂質(zhì)納米粒子的組裝及細(xì)胞靶向輸送36-65
• 2.1 前言36-38
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分38-43
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑和藥品38-39
• 2.2.2 多肽-脂質(zhì)納米粒子的制備39
• 2.2.3 快速蛋白液相色譜（FPLC）分析39
• 2.2.4 TEM觀察和DLS測(cè)量39
• 2.2.5 圓二色譜實(shí)驗(yàn)39-40
• 2.2.6 多肽和DMPC利用率的測(cè)量40
• 2.2.7 Ir(ppy)_2-DIP包封效果的評(píng)價(jià)和包封率的計(jì)算40-41
• 2.2.8 Ir(ppy)_2-DIP的體外釋放41
• 2.2.9 鎳螯合親和層析柱實(shí)驗(yàn)41
• 2.2.10 溶血實(shí)驗(yàn)41
• 2.2.11 細(xì)胞株和細(xì)胞培養(yǎng)41-42
• 2.2.12 HLF細(xì)胞的轉(zhuǎn)染42
• 2.2.13 細(xì)胞毒性分析42
• 2.2.14 入胞實(shí)驗(yàn)42-43
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論43-64
• 2.3.1 多肽的合成與表征43-52
• 2.3.2 ALA-LNPs的制備和表征52-56
• 2.3.3 Ir(ppy)_2-DIP在LNP中的包裹及穩(wěn)定性的判定56-57
• 2.3.4 ALA-LNPs環(huán)狀結(jié)構(gòu)暴露于脂質(zhì)納米顆粒表面的驗(yàn)證57-59
• 2.3.5 A(RGD)A LNP(Ir)的選擇性細(xì)胞殺傷功能59-61
• 2.3.6 A(RGD)A-LNP(Nile red)的選擇性入胞61-62
• 2.3.7 A(RGD)A LNP(Ir)多肽環(huán)狀結(jié)構(gòu)的研究62-64
• 2.4 本章小結(jié)64-65
• 第三章 陽(yáng)離子雙親性多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及細(xì)胞毒性和體外穩(wěn)定性的研究65-75
• 3.1 引言65-66
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分66-67
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料66
• 3.2.2 多肽定量66
• 3.2.3 脂質(zhì)納米粒子的制備66
• 3.2.4 脂質(zhì)乳濁液清除實(shí)驗(yàn)66
• 3.2.5 色氨酸熒光光譜藍(lán)移實(shí)驗(yàn)66-67
• 3.2.6 TEM檢測(cè)67
• 3.2.7 DLS和zeta電位的檢測(cè)67
• 3.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)67
• 3.2.9 細(xì)胞毒性檢測(cè)67
• 3.2.10 穩(wěn)定性檢測(cè)67
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論67-74
• 3.3.1 R多肽的合成和表征68-70
• 3.3.2 R多肽與脂質(zhì)相互作用分析70
• 3.3.3 R-LNP的形貌和表面性質(zhì)70-71
• 3.3.4 R-LNP的細(xì)胞毒性檢測(cè)71-72
• 3.3.5 R-LNP穩(wěn)定性檢測(cè)72-74
• 3.4 本章小結(jié)74-75
• 第四章 論文的主要結(jié)論及展望75-78
• 4.1 論文主要結(jié)論75
• 4.2 展望75-78
• 參考文獻(xiàn)78-91
• 作者在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文91-92
• 致謝92

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 潘廣瑞;趙暉;;抗菌肽在腫瘤方面的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年18期

2 王若寧;劉聰燕;周建平;陳鍵;王偉;;脂蛋白納米藥物傳輸系統(tǒng)研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年01期

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本文編號(hào)：1056621