本文關(guān)鍵詞：1、新型化合物FLZ通過調(diào)控HMGB1抑制神經(jīng)炎癥作用的機制研究 2、去氫丹參新酮對神經(jīng)炎癥的抑制作用及機制研究

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【摘要】：高遷移率族蛋白B1 (high mobility group box 1, HMGB1)是一種高度保守的核蛋白,廣泛存在于哺乳動物體內(nèi),參與核小體的形成并調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄過程。近年來研究發(fā)現(xiàn),HMGB1也是一種重要的炎癥介質(zhì),與感染、膿毒血癥、關(guān)節(jié)炎等多種.炎癥相關(guān)疾病的病理過程密切相關(guān),當組織或細胞受到損傷時被分泌到胞外,引起或加重炎癥反應,但與其他早期釋放的炎癥因子如腫瘤壞死因子,白介素等不同,HMGB1是一種晚期釋放的炎癥因子,這使得以HMGB1為靶點進行的藥物治療研究具有十分重要的臨床應用價值。FLZ是從天然產(chǎn)物中提取出的番荔枝酰胺經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造的新化合物,臨床前研究發(fā)現(xiàn)FLZ對多種體內(nèi)外帕金森氏病模型均具有明顯的神經(jīng)保護作用。FLZ能明顯抑制小膠質(zhì)細胞的過度激活,抑制炎癥因子的釋放,通過抑制神經(jīng)炎癥而間接保護神經(jīng)元。機制研究發(fā)現(xiàn)FLZ具有很好的抗炎活性,但其詳細的作用機制尚不明確,有待進一步研究。本實驗主要對FLZ調(diào)控HMGB1相關(guān)信號通路的作用機制進行研究和探討,以期明確FLZ抑制神經(jīng)炎癥作用的機制。有研究發(fā)現(xiàn)抑制HMGB1的釋放過程、抑制IMGB1與受體的結(jié)合過程以及抑制HMGB1與受體結(jié)合后引起的炎癥信號通路的激活均可以抑制HMGB1介導的炎癥反應,因此,我們通過Western blot和ELISA檢測FLZ對]1MGB1的轉(zhuǎn)移和釋放過程的影響,通過Confocal進一步觀察FLZ對HMGB1的轉(zhuǎn)移過程的影響,通過免疫共沉淀技術(shù)檢測FLZ對HMGB1與其相應受體的結(jié)合過程的影響,最后檢測FLZ對HMGB1刺激BV2細胞引起的炎癥因子NF-α釋放量的影響及TLR4/MyD88/NF-KB信號通路的影響。結(jié)果顯示,靜息狀態(tài)下HMGB1大量存在于巨噬細胞的細胞核內(nèi),在LPS的刺激下向胞漿轉(zhuǎn)移并逐漸釋放到胞外。FLZ可劑量依賴性的抑制BV2細胞中HMGB1蛋白從胞核向胞漿的轉(zhuǎn)位過程并減少神經(jīng)炎癥反應中]SMGB1的釋放量。釋放到胞外的HMGB1通過與其相應受體結(jié)合而傳遞炎癥信號,TLR4和TLR2是參與識別HMGB1的兩個主要受體,對]3MGB1與其受體結(jié)合過程的研究發(fā)現(xiàn),FLZ對HMGB1與TLR4受體的結(jié)合過程沒有明顯影響,FLZ對]HMGB1與TLR2的結(jié)合過程的影響尚在研究之中。HMGB1與TLR4受體結(jié)合后可以激活TLR4/MyD88/NF-κB信號通路,引起髓樣分化因子(myeloid differentiation factor 88, MyD88)的表達升高、蛋白激酶IKKα和IκBα的磷酸化及NF-κB的核內(nèi)轉(zhuǎn)移進而誘發(fā)炎癥反應。我們發(fā)現(xiàn)FLZ對HMGB1誘發(fā)的MyD88表達升高具有明顯的抑制作用,同時可顯著抑制KKα和IκBα的磷酸化及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活,對]HMGB1刺激BV2細胞產(chǎn)生的炎癥因子TNF-α的釋放具有顯著的抑制作用。以上結(jié)果表明,HMGB1蛋白在神經(jīng)炎癥反應中具有重要的作用,FLZ對HMG1B1介導的神經(jīng)炎癥反應具有明顯的抑制作用,這主要是與其可以抑制HMGB1的轉(zhuǎn)位和釋放以及抑制TLR4/MyD88/NF-KB信號通路的激活進而減輕HMGB1的致炎作用有關(guān)。因此,HMGB1可能是FLZ發(fā)揮抗炎作用的一個重要靶點,FLZ通過抑制HMGB1介導的神經(jīng)炎癥反應進而發(fā)揮神經(jīng)保護作用。神經(jīng)炎癥是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫應答反應,主要由腦內(nèi)免疫細胞小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞引起。當腦組織在各種病理情況下受到損傷或刺激時,小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞可由靜息態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài),吞噬清除變性的神經(jīng)組織碎片。此外,激活的膠質(zhì)細胞還會釋放大量的炎癥因子如腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-6(lnterleukin-6, IL-6)和一氧化氮(nitric oxide, NO)等,參與腦內(nèi)微環(huán)境的調(diào)節(jié),但是過度激活的膠質(zhì)細胞和過量釋放的炎癥因子也會對神經(jīng)元產(chǎn)生毒性作用,導致神經(jīng)元功能喪失、變性甚至死亡。因此神經(jīng)炎癥與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程均密切相關(guān),如在阿爾茲海默癥及帕金森氏病患者腦內(nèi)均可見到以小膠質(zhì)細胞激活為代表的神經(jīng)炎癥反應的存在。研究發(fā)現(xiàn)抑制膠質(zhì)細胞激活的藥物有助于緩解該類疾病的癥狀,提示抗炎治療對該類疾病有效。去氫丹參新酮是從我國傳統(tǒng)中藥丹參中提取的一種活性成分,已有報道其在急性肝損傷中具有顯著的抗炎作用,但是其是否具有抑制神經(jīng)炎癥的作用還沒有相關(guān)報道。在本實驗中,我們采用經(jīng)典致炎劑脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激一種鼠源的小膠質(zhì)細胞--BV2細胞,制造體外炎癥模型來研究去氫丹參新酮對神經(jīng)炎癥的抑制作用并初步探討其作用機制。實驗結(jié)果顯示去氫丹參新酮可以顯著抑制LPS誘導的小膠質(zhì)細胞表面活化標志物CD11b的表達增加,表明其具有明顯的抑制小膠質(zhì)細胞激活的作用。同時,去氫丹參新酮對LPS刺激BV2細胞產(chǎn)生的炎癥因子TNF-α, IL-6以及NO的生成均有明顯的抑制作用。此外,去氫丹參新酮對相關(guān)炎癥因子蛋白合成酶如誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)的表達也有顯著的抑制作用。在明確了去氫丹參新酮的抗炎作用之后,我們對去氫丹參新酮的抗炎作用機制進行了初步的研究。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-Kinase, PI3K)信號參與細胞增殖、分化、凋亡和葡萄糖轉(zhuǎn)運等多種功能的調(diào)節(jié)。近年來發(fā)現(xiàn),PI3K及其下游分子AKT所組成的信號通路也參與了對炎癥的調(diào)節(jié),活化的AKT可以激活NF-κB信號通路,進而激活其靶基因促進多種炎癥因子的表達。實驗結(jié)果顯示去氫丹參新酮可以抑制PI3K和AKT的磷酸化,減少Ir,B的降解,抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。這些結(jié)果表明去氫丹參新酮可能是通過PI3K/AKT信號通路抑制了NF-κB的激活,減輕下游炎癥因子的釋放,進而抑制神經(jīng)炎癥。綜上所述,去氫丹參新酮具有較好的抗神經(jīng)炎癥活性,有望開發(fā)成為新型的神經(jīng)保護劑,但其成藥性和作用機制還需要進行更加深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族蛋白B1 FLZ 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細胞 NF-κB 帕金森氏病 去氫丹參新酮 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細胞 NF-κB PI3K/AKT
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 新型化合物FLZ通過調(diào)控HMGB1抑制神經(jīng)炎癥作用的機制研究12-33
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 實驗結(jié)果19-26
• 1. LPS刺激BV2細胞引起HMGB1的釋放19-20
• 2. FLZ抑制HMGB1的出核過程20-21
• 3. FLZ抑制HMGB1的出胞過程21-22
• 4. FLZ對HMGB1與TLR4受體的結(jié)合沒有影響22-23
• 5. FLZ減少rHMGB1刺激BV2細胞引起的TNF-α生成23-24
• 6. FLZ抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的激活24-26
• 討論26-28
• 小結(jié)28-29
• 參考文獻29-33
• 第二部分 去氫丹參新酮對神經(jīng)炎癥的抑制作用及機制研究33-48
• 前言33-34
• 材料和方法34-38
• 實驗結(jié)果38-43
• 1. 去氫丹參新酮對BV2細胞24 h存活率的影響38
• 2. 去氫丹參新酮抑制LPS刺激BV2細胞引起的NO釋放38-39
• 3. 去氫丹參新酮減少炎癥因子TNF-α和IL-6的生成39-40
• 4. 去氫丹參新酮抑制小膠質(zhì)細胞的激活40-41
• 5. 去氫丹參新酮抑制炎癥蛋白iNOS和COX-2的表達41
• 6. 去氫丹參新酮抑制NF-κB信號通路的激活41-42
• 7. 去氫丹參新酮抑制PI3K p85亞基和AKT的磷酸化42-43
• 討論43-45
• 小結(jié)45-46
• 參考文獻46-48
• 文獻綜述48-57
• 參考文獻54-57
• 致謝57-59
• 個人簡歷59-60

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 羅厚蔚,胡曉潔,王寧,紀江;丹參中抑制血小板聚集的活性成分[J];藥學學報;1988年11期

2 ;[J];;年期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李德川;1、新型化合物FLZ通過調(diào)控HMGB1抑制神經(jīng)炎癥作用的機制研究 2、去氫丹參新酮對神經(jīng)炎癥的抑制作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

2 章敏;丹參中具有醌還原酶誘導活性化合物的發(fā)現(xiàn)[D];浙江大學;2010年

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本文編號：1008706