本文關(guān)鍵詞：硒和ONOO~-對晶狀體上皮細胞中Src蛋白硝化和磷酸化的影響

  更多相關(guān)文章： 硒 白內(nèi)障 硝化 磷酸化 過氧亞硝酸根 Src家族激酶

【摘要】：白內(nèi)障是導致患者失明的重要原因之一，已經(jīng)成為流行病學研究的熱點。白內(nèi)障的致病因素很多，病理復雜，但不論是老年性還是糖尿病性白內(nèi)障的形成都與氧化應(yīng)激導致晶狀體上皮細胞（LECs）的損傷相關(guān)。過氧亞硝酸根（ONOO~-）是一種強的氧化劑和硝化劑，能夠硝化蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基，激活Src激酶，活化相關(guān)信號轉(zhuǎn)導途徑，影響LEC的分化。本文以人晶狀體上皮細胞（hLECs）為對象，主要采用免疫印跡（Westernblotting）的方法，研究了ONOO~-對hLECs蛋白質(zhì)酪氨酸硝化、磷酸化的影響，以及硒對ONOO~-的影響的抑制作用。主要研究結(jié)果如下： （1）免疫印跡的結(jié)果表明，外源性硝化劑ONOO~-在100~500μM范圍內(nèi)，對hLECs總蛋白質(zhì)酪氨酸的硝化呈劑量依賴性增強，對蛋白質(zhì)酪氨酸的磷酸化具有明顯的抑制作用，說明蛋白質(zhì)酪氨酸的硝化對磷酸化具有抑制作用。在細胞培養(yǎng)基中補充適量濃度的Na_2SeO_3，能增強細胞的抗氧化損傷，抑制hLECs內(nèi)總蛋白酪氨酸的硝化水平，25nM的Na_2SeO_3能對蛋白質(zhì)酪氨酸因硝化抑制的磷酸化有明顯的削弱作用。 （2）ONOO~-在100~500μM范圍內(nèi)，高濃度的ONOO~-，能明顯降低hLECs中Src蛋白表達水平，上調(diào)其酪氨酸418（Tyr418）磷酸化水平，這種現(xiàn)象可能與細胞因ONOO~-對Src的損傷而出現(xiàn)的代償性作用有關(guān)。在先補充一定量的Na_2SeO_3(25~50nM)后，能明顯減輕ONOO~-對hLECs中Src表達的抑制，甚至能上調(diào)Src蛋白表達、抑制其Y418磷酸化的水平；但當補充Na_2SeO_3的濃度達到100nM時，雖然Src蛋白的Y418磷酸化水平升高，但hLECs中Src蛋白的表達與單純ONOO~-組比較沒有明顯的差異，這可能與高濃度的Na_2SeO_3具有促進氧化應(yīng)激有關(guān)。 以上初步的結(jié)果說明ONOO~-導致hLECs中Src蛋白酪氨酸的硝化抑制了其磷酸化，而適量的硒對這一抑制有一定的緩解作用，，但這個結(jié)論還有待進一步實驗的證實。
【關(guān)鍵詞】：硒 白內(nèi)障 硝化 磷酸化 過氧亞硝酸根 Src家族激酶
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R776.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 1 緒論7-19
• 1.1 引言7-8
• 1.2 蛋白質(zhì)硝化與磷酸化8-13
• 1.3 氧化應(yīng)激與白內(nèi)障13-15
• 1.4 Src 激酶在晶狀體細胞分化中的作用15-18
• 1.5 研究目的和主要工作18-19
• 2 材料與方法19-28
• 2.1 主要試劑及溶液配制19-22
• 2.2 主要儀器22-23
• 2.3 實驗方法23-28
• 3 結(jié)果與討論28-46
• 3.1 硒和 ONOO~-對 hLECs 存活率的影響28-32
• 3.2 硒和 ONOO~-對 hLECs 中總蛋白硝化與磷酸化的影響32-38
• 3.3 硒和 ONOO~-對 hLECs 中 Src 蛋白表達和 Tyr418 磷酸化的影響..38-46
• 4 全文總結(jié)46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-53

【參考文獻】

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本文編號：962583