目的:由于COL11A1和COL18A1基因的致病突變通常會導(dǎo)致包含有高度近視癥狀的綜合征,所以本論文擬研究COL11A1和COL18A1基因上的5個單核苷酸多態(tài)性位點(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位點(rs17127311,rs11911327,rs2236454,rs2236457,rs2236475)與中國漢族人群高度近視易感性之間的關(guān)系。而SNTB1基因作為近視易感基因,對其相關(guān)的研究和報道均比較少,所以本實驗擬進(jìn)行近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究,以便為高度近視的有效防治提供理論依據(jù)和可能的干預(yù)靶點。研究方法:對于COL11A1和COL18A1基因的研究,本實驗收集869例高度近視患者和804名正常者(均為中國漢族人群)的外周血標(biāo)本,并提取相應(yīng)的標(biāo)本DNA。根據(jù)5個SNP位點相應(yīng)序列設(shè)計上、下游引物和Snapshot引物,DNA擴(kuò)增方法采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)擴(kuò)增進(jìn)行,同時采用ABI-Snapshot技術(shù)對PCR產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步延伸,然后置于DNA測序儀上檢測其基因型。對檢測的結(jié)果...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 近視概論
    1.2 高度近視的分子遺傳學(xué)研究
        1.2.1 連鎖分析
        1.2.2 關(guān)聯(lián)分析
    1.3 高度近視疾病基因國內(nèi)外研究進(jìn)展
    1.4 近視的遺傳因素和環(huán)境因素
    1.5 單核苷酸多態(tài)性簡介
        1.5.1 單核苷酸多態(tài)性概念
        1.5.2 常見的的SNPs分析方法
        1.5.3 遺傳標(biāo)記的演化
    1.6 COL1A1和COL18A1基因以及SNTB1基因的前期研究
        1.6.1 COL1A1和COL18A1基因在近視中的前期研究
        1.6.2 SNTB1基因在近視中的前期研究
    1.7 本論文的主要內(nèi)容
        1.7.1 COL11A1和COL18A1基因多態(tài)位點與近視相關(guān)性分析
        1.7.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究
    1.8 以期完成的實驗?zāi)康?br>    1.9 本實驗的結(jié)構(gòu)安排
第二章 材料和方法
    2.1 實驗試劑和儀器
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑的配制
    2.2 實驗對象和主要生物材料
        2.2.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實驗對象
        2.2.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究的主要生物材料
    2.3 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析的實驗方法
        2.3.1 實驗對象的眼科檢查
        2.3.2 全血DNA樣本提取
        2.3.3 SNP位點的篩選和引物設(shè)計
        2.3.4 基因分型
        2.3.5 統(tǒng)計學(xué)分析方法
    2.4 SNTB1基因功能研究中質(zhì)粒的擴(kuò)增
        2.4.1 大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備與轉(zhuǎn)化
        2.4.2 質(zhì)粒提取
    2.5 SNTB1基因功能研究中293T細(xì)胞和3T3細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.6 CCK8法分析SNTB1基因?qū)?T3細(xì)胞和293T細(xì)胞增殖的影響
        2.6.1 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.6.2 細(xì)胞增殖實驗
    2.7 SNTB1基因功能研究中細(xì)胞遷移實驗
        2.7.1 實驗用鼠尾膠原制備
        2.7.2 Transwell檢測細(xì)胞遷移
    2.8 SNTB1基因功能研究中細(xì)胞粘附實驗
        2.8.1 Matrigel檢測細(xì)胞粘附
第三章 結(jié)果
    3.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實驗結(jié)果
        3.1.1 研究對象臨床資料
        3.1.2 GeneticAnalyzer軟件基因分型結(jié)果
        3.1.3 Sanger直接測序法驗證基因分型
        3.1.4 統(tǒng)計學(xué)分析
        3.1.5 連鎖不平衡和單體型分析
    3.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究實驗結(jié)果
        3.2.1 CCK8法分析SNTB1基因?qū)?xì)胞增殖的影響
        3.2.2 SNTB1基因?qū)?T3細(xì)胞和293T細(xì)胞遷移粘附的影響
第四章 討論
    4.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實驗結(jié)果分析
        4.1.1 COL11A1和COL18A1基因?qū)嶒灲Y(jié)果分析
        4.1.2 易感基因分析
    4.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究實驗結(jié)果分析
        4.2.1 SNTB1基因?qū)嶒灲Y(jié)果分析
        4.2.2 SNTB1基因編碼的蛋白相關(guān)功能分析
第五章 全文總結(jié)與展望
    5.1 本研究結(jié)果總結(jié)
        5.1.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實驗結(jié)果總結(jié)
        5.1.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究實驗結(jié)果總結(jié)
    5.2 下一步工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果



本文編號：4042143