發(fā)布時間：2017-05-22 11:00

  本文關(guān)鍵詞：白細胞介素22與33在大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景角膜病在我國致盲的主要原因中位居第二,角膜移植是目前臨床上醫(yī)治角膜盲唯一、有效的復(fù)明手段。眼球是一個獨特的免疫器官：其自身具有免疫赦免及前房相關(guān)免疫偏離的免疫學(xué)特點,同時角膜組織中沒有血管及淋巴管,因此,角膜移植手術(shù)的成功率較其它組織器官明顯增高。盡管如此,角膜移植術(shù)后發(fā)生的免疫排斥反應(yīng)依然是致使移植失敗的最重要原因。研究認為,角膜移植免疫應(yīng)答過程由多種類型免疫細胞、活化因子協(xié)同介導(dǎo),同時受多種因素的影響。充分了解免疫排斥反應(yīng)過程中各種免疫細胞和細胞因子的作用及其作用機制,有助于為將來角膜移植排斥反應(yīng)的臨床預(yù)防、診斷及治療提供新的思路。近年來,許多新型細胞因子陸續(xù)被發(fā)現(xiàn),并被證實在移植免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。白細胞介素22(interleukin-22,IL-22)和白細胞介素33(interleukin-33,IL-33)分別屬于近年來發(fā)現(xiàn)的白細胞介素10(IL-10)和白細胞介素1(IL-1)家族新成員。IL-22通過與其受體復(fù)合物(IL-22R1-IL-10R2)結(jié)合,激活細胞內(nèi)酪氨酸激酶Jak1、Tyk2、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路(MEK-ERK-RSK、JNK/SAPK和p38激酶),廣泛參與調(diào)控機體多種疾病(如慢性炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤和移植免疫反應(yīng)等)的免疫應(yīng)答過程。IL-33與其跨模型ST2受體(ST2L)相互作用,可誘導(dǎo)MyD88、IRAK1和IRAK4、TRAF6等分子聚集,進一步激活胞內(nèi)核因子-κB (NF-κB)和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)(包括ERK1、ERK2、p38及JNK1)信號通路,參與機體免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)。除此之外,還可上調(diào)樹突狀細胞(DCs)表面MHCⅡ分子及共刺激分子CD86的表達,增強DCs的抗原提呈功能�；诎准毎樗�-22(IL-22)和白細胞介素-33(IL-33)這兩類新型細胞因子在固有免疫及適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中具有重要免疫學(xué)效應(yīng),目前它們在機體多種疾病(尤其是自身免疫性疾病、過敏性疾病、感染及心血管疾病)中的調(diào)節(jié)作用已得到廣泛研究,在器官移植免疫方面也引起了人們的重視。至今為止,國內(nèi)外關(guān)于IL-22、IL-33在角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用還沒有相關(guān)的研究報告。為此,本課題通過建立SD-Wistar大鼠間的穿透性角膜移植模型,以白細胞介素-22(IL-22)和白細胞介素-33(IL-33)這兩種新型細胞因子為研究對象,觀察角膜移植術(shù)后不同時間點植片中IL-22、IL-33的表達變化,初步探討其在角膜移植術(shù)后免疫反應(yīng)中的潛在生物學(xué)效應(yīng)及其作用機制,為將來更有效地臨床預(yù)防和治療角膜移植免疫排斥反應(yīng)提供新的策略。第一部分 IL-22在大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用探討目的探討IL-22在大鼠角膜組織中的表達及其在角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)中的作用。方法1.穿透性角膜移植模型的建立與實驗分組：分別取24只SD大鼠作為移植供體,72只Wistar大鼠作為受體,行同種異體間角膜穿透性移植術(shù)。實驗將72只受體隨機分為三組：自體角膜移植組(B)、角膜移植排斥組(C)和角膜移植后典必殊治療組(D),另取4只Wistar鼠共8只眼作正常對照(即正常對照組A)。D組術(shù)后每日滴典必殊眼液,每日2次,每次1滴,共用2周。2.角膜植片的臨床觀察及評分標(biāo)準(zhǔn)：角膜移植術(shù)后14天內(nèi),每日在裂隙燈顯微鏡下觀察角膜植片的混濁程度、水腫程度及新生血管生長情況；14天后,隔日觀察一次,觀察期為30天。參照Larkin等的評分方法,對角膜混濁程度、水腫程度及新生血管情況進行評估,角膜混濁程度分為0-4級(0：植片完全透明；1：植片輕度混濁；2：植片中度混濁,裂隙燈下虹膜血管可見；3：虹膜血管窺不清,僅可見瞳孔輪廓；4：植片完全混濁,瞳孔輪廓窺不清)；角膜水腫程度分為0-2級(0：植片未發(fā)生水腫；1：植片出現(xiàn)中度水腫；2：植片明顯水腫,伴基質(zhì)層顯著增厚)；角膜新生血管分為0-4級(0：植片無新生血管形成；1：新生血管長至植片任一象限半徑的25%處；2：新生血管長至植片任一象限半徑的50%處；3：新生血管長至植片任一象限半徑的75%處；4：新生血管長至植片中央?yún)^(qū)域)。上述3項指標(biāo)的評分總和為當(dāng)日排斥反應(yīng)指數(shù)(RI),如三項評分總和(m)≥5分或者植片混濁度一項達到3分,則認為角膜植片發(fā)生免疫排斥。3.組織病理學(xué)檢測：各組分別于術(shù)后第5、14天隨機抽取3只大鼠眼球,標(biāo)本取出后立即行4%多聚甲醛固定,固定完成后再經(jīng)不同濃度乙醇梯度脫水、石蠟包埋,然后制備成5μm厚的連續(xù)切片,采用蘇木素-伊紅(HE)染色,中性樹膠封片,光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。4.實時熒光定量PCR (RT-PCR)檢測：各組分別于角膜移植術(shù)后第5、14天隨機取5只角膜,并立即置于-80。冰箱保存。按取材時間點分別進行RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴增反應(yīng),觀察角膜組織中IL-22mRNA和AhRmRNA的表達情況。結(jié)果1.各組角膜植片的臨床觀察：角膜移植術(shù)后前3天,各組角膜植片均出現(xiàn)輕度水腫、混濁,B、C組角膜緣處出現(xiàn)新生血管,D組角膜緣未見新生血管。B組和D組角膜植片水腫、混濁程度隨時間延長逐步減輕,而C組植片則進行性加重直至徹底混濁,且伴隨植片增厚。另外,B組和C組角膜新生血管由植床向植片方向逐漸延伸,于術(shù)后第14天可達到植片中央,而D組新生血管僅局限于角膜緣。2.各組角膜植片的存活時間(MST)：C組角膜植片平均存活(10.13+0.44)d,D組平均存活(18.00±0.66)d,二者間具有顯著性差異(P0.01)。3.A組大鼠角膜上皮層由5-6層細胞所構(gòu)成,基質(zhì)層膠原纖維排列規(guī)則,無水腫及炎性細胞浸潤。C組角膜植片顯著水腫伴基質(zhì)層增厚,基質(zhì)層中膠原纖維結(jié)構(gòu)紊亂,炎性細胞彌漫性浸潤,并可見新生血管管腔,術(shù)后第14d較5d更加明顯。而B組和D組角膜結(jié)構(gòu)基本正常,基質(zhì)層僅有少許炎性細胞浸潤。4.各組IL-22和AhRmRNA在不同時間點的表達：A、B組角膜植片內(nèi)均可見IL-22mRNA表達,C組IL-22mRNA的表達水平顯著增加,而D組角膜IL-22mRNA的表達較C組明顯降低(P0.05)；另外,AhRmRNA有類似表達趨勢。結(jié)論IL-22可能參與了大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生過程,而AhR參與IL-22的表達調(diào)控過程。第二部分IL-33在大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用目的探討IL-33在大鼠角膜組織中的表達以及對角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)的影響。方法1.穿透性角膜移植模型的建立與實驗分組：取4只Wistar鼠(8只眼)作為正常對照組(A),24只Wistar鼠作為自體角膜移植組(B),另取24只SD鼠為供體和48只Wistar鼠為受體進行同種異體間穿透性角膜移植(C、D),D組術(shù)后每日滴典必殊眼液(2次/d),共2周。2.角膜植片的臨床觀察及評分標(biāo)準(zhǔn)：角膜移植術(shù)后14天內(nèi),每日在裂隙燈顯微鏡下觀察角膜植片的混濁程度、水腫程度及新生血管生長情況；14天后,隔日觀察一次,觀察期為30天。參照Larkin等的評分方法,對角膜混濁程度、水腫程度及新生血管情況進行評分,角膜混濁程度分為0-4級(0：植片完全透明；1：植片輕度混濁;2：植片中度混濁,裂隙燈下虹膜血管可見；3：虹膜血管窺不清,僅可見瞳孔輪廓；4：植片完全混濁,瞳孔輪廓窺不清)；角膜水腫程度分為0-2級(0：植片未發(fā)生水腫；1：植片出現(xiàn)中度水腫；2：植片明顯水腫,伴基質(zhì)層顯著增厚)；角膜新生血管分為0-4級(0：植片無新生血管形成;1：新生血管長至植片任一象限半徑的25%處；2：新生血管長至植片任一象限半徑的50%處；3：新生血管長至植片任一象限半徑的75%處；4：新生血管長至植片中央?yún)^(qū)域)。上述3項指標(biāo)的評分總和為當(dāng)日排斥反應(yīng)指數(shù)(RI),如三項總和(RI)"g5分或者植片混濁度一項達到3分,則認為角膜植片發(fā)生免疫排斥。3.組織病理學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)檢測：各組分別于角膜移植術(shù)后第5、14天隨機取3只大鼠眼球行4%多聚甲醛固定,經(jīng)梯度酒精脫水、石蠟包埋,然后制備成5μm厚的連續(xù)切片,采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察角膜組織病理學(xué)改變,并行免疫組織化學(xué)檢測角膜組織中ST2蛋白的表達水平,光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。4.實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測：各組分別于術(shù)后第5、14天隨機取5只角膜,并立即置于-80°冰箱保存。按取材時間點分別進行RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴增反應(yīng),檢測角膜組織中IL-33mRNA、ST2mRNA的表達水平。結(jié)果1.各組角膜植片的臨床觀察：角膜移植術(shù)后前3天,各組角膜植片均出現(xiàn)輕度水腫、混濁,B、C組角膜緣處出現(xiàn)新生血管,D組角膜緣未見新生血管。B組和D組角膜植片水腫、混濁程度隨時間延長逐步減輕,而C組植片則進行性加重直至徹底混濁,且伴隨植片增厚。另外,B組和C組角膜新生血管由植床向植片方向逐漸延伸,于術(shù)后第14天可達到植片中央,而D組新生血管僅局限于角膜緣。2.各組角膜植片的存活時間(MST):C組角膜植片平均存活(10.13+0.44)d,D組平均存活(18.00±0.66)d,經(jīng)Log-rank檢驗,二者間具有顯著性差異(x2=16.442,P=0.000)。3.A組大鼠角膜上皮層由5～6層細胞所構(gòu)成,基質(zhì)層膠原纖維排列有序,無水腫及炎性細胞浸潤。C組角膜植片顯著水腫伴基質(zhì)層增厚,基質(zhì)層中膠原纖維結(jié)構(gòu)紊亂,炎性細胞彌漫性浸潤,并可見新生血管管腔,術(shù)后第14d較5d更加明顯。而B組和D組角膜結(jié)構(gòu)基本正常,基質(zhì)層僅有少許炎性細胞浸潤。4.術(shù)后不同時間點各組IL-33mRNA、ST2mRNA及ST2蛋白的表達：IL-33mRNA、ST2mRNA及ST2蛋白在A組和B組角膜組織中均可見表達,在C組中表達水平顯著增加,而在D組中表達明顯減少(P0.05)。結(jié)論IL-33可能參與了大鼠角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：IL-22 大鼠 角膜移植 免疫排斥 IL-33 大鼠 角膜移植 免疫排斥
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R779.65
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 第一章 前言18-28
• 參考文獻24-28
• 第二章 IL-22在大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用探討28-46
• 1 材料和方法28-35
• 2 結(jié)果35-39
• 3 討論39-42
• 參考文獻42-46
• 第三章 IL-33在大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用46-64
• 1 材料和方法46-53
• 2 結(jié)果53-58
• 3 討論58-61
• 參考文獻61-64
• 問題及展望64-65
• 附綜述 白細胞介素22(IL-22)的研究現(xiàn)狀及進展65-77
• 參考文獻72-77
• 研究成果77-78
• 致謝78-79

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 馬瑞松;江洪;李元紅;胡笑容;李雪飛;;白介素33下調(diào)高遷移率族蛋白1保護大鼠缺血再灌注心肌的研究[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年08期

2 馬瑞松;李元紅;江洪;胡笑容;李雪飛;;IL-33對大鼠I/R損傷心肌炎癥反應(yīng)和細胞自噬的影響[J];山東醫(yī)藥;2015年22期

3 江洪;馬瑞松;李元紅;胡笑容;李雪飛;;白介素33激活P38-MAPK通路保護心肌缺血再灌注損傷[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2015年12期

4 馬瑞松;李元紅;江洪;;IL-33及其受體在心血管疾病中的研究進展[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2015年07期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 羅藝;IL-33促進Th2應(yīng)答和抑制Th17應(yīng)答的效應(yīng)能夠緩解小鼠缺血性腦損傷[D];華中科技大學(xué);2014年

2 吳芳琴;IL-33/ST2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路基因多態(tài)性與冠心病和高血壓相關(guān)性研究[D];華中科技大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 韋利強;IL-26在銀屑病中的表達及作用機制[D];鄭州大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：白細胞介素22與33在大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：385466