發(fā)布時間：2021-05-16 06:24

　　目的:調(diào)節(jié)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的基因表達,探討下調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白相關(guān)基因表達的可能。方法:采用基因編輯系統(tǒng)對人源視網(wǎng)膜ARPE-19宿主細胞進行相應(yīng)的基因編輯,運用Crispr Cas 9基因編輯系統(tǒng)對細胞中的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白基因進行敲除,并且對細胞中的目標基因葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的基因編輯效率進行驗證,考察基因編輯系統(tǒng)在人視網(wǎng)膜色素上皮中的編輯效果。結(jié)果:實現(xiàn)了葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白相關(guān)基因的敲除,完成了人源視網(wǎng)膜色素上皮細胞ARPE-19基因缺陷型單克隆細胞株的構(gòu)建。結(jié)論:利用Crispr Cas9技術(shù)對視網(wǎng)膜細胞的內(nèi)源性基因進行編輯,有可能作為基因治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的新策略。我們證實了設(shè)計的針對葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的sgRNA可以準確靶向并定點切割目標基因,并且這種治療策略在細胞學(xué)方面是安全有效的。使用sgRNA對內(nèi)源葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白基因進行了敲除是具有治療意義的,從根本上解決了糖尿病性視網(wǎng)膜病變眼內(nèi)葡萄糖蓄積而產(chǎn)生的各種細胞損害,是一種潛在的治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的手段。 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 綜述
    1.1 糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機理
        1.1.1 糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病的相關(guān)因素
        1.1.2 糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病的相關(guān)機制
    1.2 糖尿病性視網(wǎng)膜病變的治療方法
        1.2.1 藥物治療
        1.2.2 非藥物治療
    1.3 糖尿病性視網(wǎng)膜病變的基因水平的治療
        1.3.1 高血糖
        1.3.2 缺氧
        1.3.3 血管緊張素Ⅱ
第2章 實驗內(nèi)容
    2.1 檢測細胞
        2.1.1 細胞狀態(tài)檢測
        2.1.2 目標基因檢測
        2.1.3 檢測結(jié)果
    2.2 SGRNA設(shè)計、制備及體外篩選,CRISPR載體構(gòu)建以及SGRNA細胞內(nèi)篩選
        2.2.1 SGRNA設(shè)計
        2.2.2 SGRNA制備
        2.2.3 SGRNA體外篩選
        2.2.4 CRISPR載體構(gòu)建
        2.2.5 SGRNA細胞內(nèi)篩選
    2.3 完成單克隆細胞的培養(yǎng)和單克隆細胞的篩選
        2.3.1 單克隆細胞的培養(yǎng)
        2.3.2 單克隆細胞的篩選
    2.4 單克隆細胞質(zhì)量檢測
        2.4.1 將篩選完成的單克隆細胞株擴大培養(yǎng)后進行支原體檢測
        2.4.2 培養(yǎng)的單克隆細胞株生長狀態(tài)正常
參考文獻
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]增殖型糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者玻璃體切割術(shù)前應(yīng)用雷珠單抗的臨床療效[D]. 李相哲.延邊大學(xué) 2015



本文編號：3189154