【摘要】：目的:變應(yīng)性鼻炎(AR)是耳鼻喉科常見病,是一種由變應(yīng)原引起的以Th2型細(xì)胞免疫為主的變應(yīng)性疾病,其發(fā)病率高且患病率呈上升趨勢(shì),目前尚無有效根治方法。腦惡性腫瘤缺失基因1(DMBT1)是一種主要來源于上皮細(xì)胞的分泌性糖蛋白,在整個(gè)免疫系統(tǒng)都有表達(dá),目前已知它的表達(dá)異常與炎癥和腫瘤有關(guān),但在變應(yīng)性鼻炎中的作用目前尚無文獻(xiàn)報(bào)道。前期研究顯示DMBT1在變應(yīng)性鼻炎患者基因及蛋白水平表達(dá)有明顯差異,推測(cè)該蛋白與變應(yīng)性鼻炎疾病有關(guān),需要進(jìn)一步研究以闡明其機(jī)制。方法:首先利用ELISA法檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎患者及正常人鼻腔灌洗液DMBT1蛋白表達(dá),利用免疫組化法檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎患者及正常人鼻下鼻甲黏膜DMBT1蛋白表達(dá)情況。進(jìn)一步通過OVA(雞卵清白蛋白)致敏Balb/c小鼠,構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎小鼠疾病模型,利用Western blot法及免疫組化、免疫熒光的方法檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎小鼠模型組與生理鹽水對(duì)照組小鼠鼻黏膜DMBT1表達(dá)情況。此外,我們通過建立不同表達(dá)重組DMBT1蛋白干預(yù)的變應(yīng)性鼻炎疾病小鼠,觀察其行為學(xué)指標(biāo),并利用ELISA法檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液Th2型細(xì)胞因子表達(dá)、血清IgE表達(dá),HE(Hematein Eosin,HE)染色法計(jì)數(shù)小鼠鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)浸潤(rùn)情況。結(jié)果:1、ELISA法檢測(cè)DMBT1蛋白表達(dá)在變應(yīng)性鼻炎患者鼻腔灌洗液中表達(dá)上調(diào);免疫組化檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎患者下鼻甲黏膜中DMBT1蛋白表達(dá)明顯上調(diào)。2、BALB/c小鼠經(jīng)OVA+氫氧化鋁凝膠佐劑干預(yù)后,從行為學(xué)、組織學(xué)、免疫功能(外周血OVAsIgE測(cè)定)三方面均符合典型變應(yīng)性鼻炎疾病改變(小鼠AR模型建立成功),Western blot、免疫組化、免疫熒光法檢測(cè)其鼻黏膜DMBT1蛋白水平明顯較生理鹽水對(duì)照組表達(dá)升高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=5,P0.05)。3、對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠進(jìn)行重組DMBT1蛋白滴鼻后,小鼠行為學(xué)指標(biāo)(撓鼻、噴嚏次數(shù))下降,肺泡灌洗液中Th2型細(xì)胞因子表達(dá)下降,鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=5,P0.05)結(jié)論:1、本研究首次發(fā)現(xiàn)了DMBT1在鼻部為分泌性;首次發(fā)現(xiàn)在變應(yīng)性鼻炎患者鼻部DMBT1表達(dá)升高;2、利用OVA+氫氧化鋁凝膠佐劑干預(yù)BALB/c小鼠可成功構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎小鼠疾病模型;變應(yīng)性鼻炎組小鼠鼻黏膜DMBT1蛋白表達(dá)明顯升高,提示該疾病模型可以為研究DMBT1對(duì)變應(yīng)性鼻炎疾病的作用提供良好的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ);3、本研究首次發(fā)現(xiàn)DMBT1對(duì)Th2細(xì)胞具有抑制作用。提示DMBT1可能作為一種保護(hù)鼻黏膜的蛋白,具有抑制Th2細(xì)胞免疫的作用,對(duì)變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病和/或疾病進(jìn)展有抑制作用。DMBT1有望為變應(yīng)性鼻炎的治療提供新方法新思路。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R765.21
【圖文】：

DMBT1 保護(hù)小鼠變應(yīng)性鼻炎作用的機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，兩組獨(dú)立樣本比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（一）、免疫組化檢測(cè) DMBT1 在 AR 組患者下鼻甲黏膜中表達(dá)升高鼻黏膜 DMBT1 免疫組織化學(xué)分析結(jié)果提示：DMBT1 主要表達(dá)在鼻黏膜上皮細(xì)胞及其表面表達(dá)（如圖 1-1）；400 倍鏡下兩組陽(yáng)性染色百分比比較結(jié)果如下：對(duì)照組為 9.894±1.562，AR 組為 19.97±6.503，如圖1-2 。（n=5, P<0.01）

海軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文- 14 -圖1-2 人鼻黏膜DMBT1陽(yáng)性染色百分比與對(duì)照組相比，AR組顯示DMBT1陽(yáng)性染色百分比明顯升高 (n=5, P < 0.01).（二）、ELISA 檢測(cè) DMBT1 在 AR 患者鼻腔灌洗液中表達(dá)升高正常對(duì)照組中，鼻腔灌洗液 DMBT1 表達(dá)為 0.694ng/ml (0.694±0.089ng/ml)；AR組鼻腔灌洗液 DMBT1 表達(dá)為 1.547ng/ml (1.547±0.152ng/ml)。經(jīng)兩個(gè)獨(dú)立樣本 T 檢驗(yàn)顯示，AR 組和對(duì)照組表達(dá)均存在顯著性差異(n=5, P <0.01)。結(jié)果見表 1，圖 2。表 1 鼻腔灌洗液 DMBT1 表達(dá)(ng/ml)Group 表達(dá) Mean( ±s) P 值*Control 0.651 0.801 0.682 0.576 0.758 0.694±0.089AR 1.585 1.676 1.305 1.502 1.665 1.547±0.152 0.008*獨(dú)立樣本 T 檢驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間的表達(dá)存在顯著性差異(n=5, P<0.01)圖2 人鼻腔灌洗液中DMBT1 表達(dá)與對(duì)照組相比，AR組鼻腔灌洗液DMBT1表達(dá)明顯上升（n=5, P < 0

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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3 趙秀杰;董震;楊占泉;趙德榮;;鼻超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;1993年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

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本文編號(hào)：2720632