【摘要】：研究背景：真菌性角膜潰瘍?yōu)槿蜃钪饕闹旅ば匝鄄?高發(fā)于以農(nóng)業(yè)為主的發(fā)展中國家,我國是真菌性角膜潰瘍的高發(fā)地區(qū),近幾年來真菌性角膜潰瘍的報道研究越來越多,相關(guān)的臨床流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率已上升到感染性角膜病的首位,因此,真菌性角膜潰瘍的防治課題已成為我國致盲性眼疾的重要臨床課題。 通常情況下,真菌感染時很少侵犯正常角膜,但當(dāng)角膜上皮組織被破壞,角膜基質(zhì)層直接與真菌接觸時,真菌就能通過破損處破壞角膜上皮下層以及基質(zhì)層,導(dǎo)致真菌性角膜潰瘍。因此,角膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞在激活角膜的固有免疫反應(yīng)和抵抗真菌入侵中有重要作用。眾多研究已經(jīng)證明了TLR是人體固有免疫系統(tǒng)激活的關(guān)鍵因子,位于細(xì)胞膜的TLR識別來自細(xì)胞外部的病原體。但是病原微生體為了避免被識別,有其他侵入和通過上皮細(xì)胞層的方式,但是正常情況下真菌體內(nèi)的感染率并不高,這說明在避過TLR的識別后,機(jī)體一定還有其他的方式來識別入侵真菌。NOD受體蛋白家族能識別細(xì)胞內(nèi)的危險信號,啟動固有免疫系統(tǒng),它代明了細(xì)胞內(nèi)同樣有防御監(jiān)測手段。NOD受體是目前的研究熱點之一,但是關(guān)于它在角膜細(xì)胞中的表達(dá),在抗真菌過程中的作用以及它與TLR的相互關(guān)系目前鮮有報道。 目的：研究細(xì)胞內(nèi)模式識別受體核苷酸結(jié)合的寡聚結(jié)構(gòu)域NOD受體NOD1、NOD2在角膜細(xì)胞中的表達(dá)及其激活角膜細(xì)胞固有免疫過程中的作用,并探討它與Toll樣受體TLR4在此過程中的相互關(guān)系。 方法：體外培養(yǎng)永生化人角膜上皮細(xì)胞(THCE)和永生化人角膜基質(zhì)細(xì)胞(THSF),實驗細(xì)胞分為6組,分別更換DMEM培養(yǎng)液、LPS刺激液(1μg/ml)、DAP刺激液(10μg/ml)、MDP刺激液(10μg/ml)、LPS(1μg/ml)和DAP(10μg/ml)聯(lián)合刺激液、LPS(1μg/ml)和MDP(10μg/ml)聯(lián)合刺激液,于刺激后1h,3h,6h,12h,24h分別收取細(xì)胞上清以及細(xì)胞。用ELISA法測定上清中的TNF-α和IL-6的分泌,用實時RT-PCR檢測角膜細(xì)胞中NOD1、NOD2和TLR4的mRNA表達(dá),以及抗菌肽hBD2和LL37的mRNA的表達(dá)。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件,數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組內(nèi)比較采用t檢驗,各組間的比較采用方差分析,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：在相應(yīng)配體刺激下角膜細(xì)胞中NOD1、NOD2的表達(dá)呈時間依賴性上調(diào),并能引起細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中IL-6和TNF-α的分泌增多,以及抗菌肽LL37和hBD2的表達(dá)增加。聯(lián)合刺激組比單獨刺激組的表達(dá)量明顯增高,TLR4和NOD受體間表現(xiàn)出協(xié)同作用。 結(jié)論：這些結(jié)果提示角膜細(xì)胞中的NOD1、NOD2和TLR4這兩種胞內(nèi)外模式識別受體介導(dǎo)的固有免疫信號傳導(dǎo)通路參與了角膜上皮細(xì)胞的固有免疫反應(yīng),在角膜上皮細(xì)胞的抗真菌反應(yīng)中起到一定作用,NOD1、NOD2在角膜細(xì)胞中表達(dá)并能激活其固有免疫系統(tǒng),誘導(dǎo)其分泌促炎癥細(xì)胞因子。NOD2于TLR4在激活角膜細(xì)胞固有免疫系統(tǒng),誘導(dǎo)其分泌促炎癥細(xì)胞因子的過程中具有協(xié)同作用,為今后免疫治療提供了新的思路和靶點。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R772.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2667472