發(fā)布時(shí)間：2018-04-20 11:17

  本文選題：女性 + Graves眼病　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：目的： 1.分析雌激素受體a(ERa)基因XbaⅠ和PvulⅠ酶切多態(tài)性和雌激素受體β(ERβ)基因Rsa Ⅰ和Alu Ⅰ多態(tài)性對(duì)女性Graves眼病患者的遺傳影響。 2.研究不同ER-a基因Xba Ⅰ位點(diǎn)基因型下女性Graves病患者(包括Graves眼病患者)外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞數(shù)量和雌二醇(E2)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1).腫瘤壞死因子-a(TNF-a)及甲狀腺功能的異同。 3.通過(guò)對(duì)女性GO患者治療前后其外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中ERa和FoxP3基因的表達(dá)水平的檢測(cè),并與正常人群做比較分析,并以雌激素受體α基因Xba Ⅰ位點(diǎn)的3個(gè)基因型分為3組,進(jìn)行組間的對(duì)比,觀察ERa基因Xba Ⅰ多態(tài)性對(duì)ERa及FoxP3mRNA表達(dá)的影響,探討ER-a基因Xba Ⅰ多態(tài)性在女性GO發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法： 1.設(shè)立4組觀察對(duì)象。分別為正常女性組,共126人；GD組,確診為GD18個(gè)月以上,未出現(xiàn)眼征患者,共67人；GO-S組,診斷為GD后,18個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)眼征患者,共56人；GO-L組,診斷為GD后,18個(gè)月以上出現(xiàn)眼征患者,共40人；應(yīng)用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)的方法,檢測(cè)受試對(duì)象ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ位點(diǎn)、ERβ基因Rsa Ⅰ和Alu Ⅰ位點(diǎn)多態(tài)性分布的情況；分析ERa基因與ERβ基因多態(tài)性與女性GO發(fā)病之間的相關(guān)關(guān)系。 2.選取月經(jīng)周期正常的初發(fā)女性GD患者72人,其中包括有眼征患者22人,同時(shí)選取月經(jīng)正常的女性50人作為對(duì)照組,在月經(jīng)期的卵泡期(月經(jīng)后3-7天)采取空腹靜脈血,采用電化學(xué)發(fā)光測(cè)試儀測(cè)定E2、TSH、FT3、FT4、TPOAb、 TGAb;化學(xué)發(fā)光法測(cè)定TRAb;流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞數(shù)量,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中IL-10、TGF-β1、TNF-α的含量。以ER-a基因XbaⅠ位點(diǎn)基因型分為三組,比較三組上述指標(biāo)的差異。 3.選取女性活動(dòng)性GO患者84名,潑尼松進(jìn)行治療,在治療前后分別記錄臨床活動(dòng)期評(píng)分(clinical activity score, CAS), E2濃度,并分離新鮮外周血單個(gè)核細(xì)胞,提取總RNA,利用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增ERα及FoxP3mRNA,通過(guò)凝膠圖像系統(tǒng)對(duì)PCR產(chǎn)物的電泳條帶進(jìn)行掃描半定量分析。將84名患者以ER-a基因Xba Ⅰ多態(tài)位點(diǎn)的不同,分為三組,分別進(jìn)行對(duì)比。 結(jié)果： 1.GO-S組AA基因型頻率為80.4%,而正常對(duì)照組、GD組、GO-L組AA基因型頻率分別為46.8%、59.1%和57.5%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005)。并且,GO-S組與正常對(duì)照組、GD組、GO-L組差異具均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.000,0.04,0.042)；將GD組、GO-S和GO-L合并與正常對(duì)照組相比較,AA基因型頻率差異分為為66%和46.8%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)；GO-S組與GD組、GO-L組A等位基因頻率分別為88.4%、75.4%和59.4%,計(jì)算暴露于A等位基因與GO-S的聯(lián)系強(qiáng)度OR得出,GO-S組與GD組相比,暴露于A等位基因的OR(95%CI)為2.11(1.203-3.699),與GO-L相比,暴露于A等位基因的OR(95%CI)為2.45(1.312-4.575)；正常對(duì)照組、GD組、GO-S組和GO-L組在Pvu Ⅱ多態(tài)性的分布差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.698)：ERβ基因Alu Ⅰ位點(diǎn)多態(tài)性的分布中,正常組、GD、GO-S和GO-L4組AA基因型分布總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032),其A等位基因頻率分布總體差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)。GD、GO-S和GO-L3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.910);GD、GO-S和GO-L3組數(shù)據(jù)合并,與正常對(duì)照組組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。計(jì)算暴露于A等位基因與GD的聯(lián)系強(qiáng)度OR得出,與正常對(duì)照組相比,暴露于A等位基因的OR(95%CI)為1.71(1.272-2.299)；正常對(duì)照組、GD組、GO-S組和GO-L組在AluⅠ多態(tài)性的分布差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.836)。 2.對(duì)照組中,不同基因型人群其外周血的TSH、FT3、FT4、TPOAb、TGAb、 TRAb、E2、CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞及IL-10、TGF-β1、TNF-α的含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；GD組中,不同基因型人群其外周血的TSH、FT3、FT4、TPOAb、 TGAb、TRAb、E2和TGF-β1的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；GD組的E2、TNF-α的含量顯著大于正常對(duì)照組(P=0.000),CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞數(shù)量顯著少于正常對(duì)照組(P=0.000)；GD組中,以GG基因型、GA基因型和AA基因型分為3組,GG組CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞數(shù)量最多,AA組最少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015)；GG組IL-10含量最多,AA組最少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)；GG組TNF-a含量最少,AA組最多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.治療前,CAS評(píng)分及E2濃度在GG、GA和AA基因型組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.684和P=0.714),治療后,CAS評(píng)分及E2濃度均有下降,但GG組下降幅度最大,AA組較少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)；E2濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.778)；治療前,GO組ERα mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P0.05),GG組高于GA組和AA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.029和0.002),治療后,GO組ERα mRNA表達(dá)明顯下降(P0.05),GG組高于GA組和AA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.039和0.014)；治療前,GO組FoxP3mRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組(P0.05),GG組高于GA組和AA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.039),治療后,GO組FoxP3mRNA表達(dá)與治療前相比明顯上升(P0.05),GG組高于AA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)。 結(jié)論： 1.在ERa基因Xba Ⅰ位點(diǎn)多態(tài)性方面,AA基因型與GD的發(fā)生有關(guān),是GD的易感基因型,并且與GO的發(fā)生時(shí)間有著密切關(guān)系,是GO早發(fā)的危險(xiǎn)因素;在ERβ基因AluⅠ位點(diǎn)多態(tài)性方面,等位基因A是GD的易感基因,AA基因型是GD的易感基因型,不是GO早發(fā)的危險(xiǎn)因素：ERa基因PvuⅡ酶切位點(diǎn)多態(tài)性及ERβ基因Rsa Ⅰ位點(diǎn)多態(tài)性與GO的發(fā)生發(fā)展無(wú)關(guān)。 2.ER-α基因Xba Ⅰ基因位點(diǎn)A等位基因的出現(xiàn)增多,抑制炎癥因子IL-10減少,促炎因子TNF-α增多,最終導(dǎo)致AA基因型組CD4+CD25+Foxp3+Treg數(shù)量最少,而GG基因型組抑制炎癥因子IL-10較多,促炎因子TNF-α較少,CD4+CD25+Foxp3+Treg數(shù)量最多,AA基因型組的免疫抑制力較差,可能導(dǎo)致了攜帶該基因型患者GO早發(fā)的幾率增大。 3.隨著等位基因G的增多,ER-αmRNA和Foxp3mRNA也相應(yīng)增多,治療效果相對(duì)較好,G等位基因是保護(hù)性基因�？赡苡捎贓Ra基因XbaI位點(diǎn)多態(tài)性導(dǎo)致的ER受體數(shù)量不同,影響E2促進(jìn)Treg發(fā)揮免疫抑制功能,而使?jié)娔崴芍委熁顒?dòng)性GO患者的效果存在差異。
[Abstract]:Objective:
1. the genetic influence of the polymorphism of the estrogen receptor A (ERa) gene Xba I and Pvul I and the polymorphism of the estrogen receptor beta (ER beta) gene Rsa I and Alu I on women with Graves eye disease was analyzed.
2. the number of CD4+CD25+FoxP3+Treg cells in peripheral blood and estradiol (E2), interleukin -10 (IL-10), TGF - beta 1 (TGF- beta 1), tumor necrosis factor -a (TNF-a) and thyroid function were studied in the peripheral blood of women with different ER-a gene Xba I loci (including Graves ophthalmopathy).
3. the expression level of ERa and FoxP3 genes in the peripheral blood mononuclear cells (peripheral blood mononuclear cells, PBMCs) before and after treatment of female GO patients was detected and compared with the normal population, and the 3 genotypes of the estrogen receptor alpha gene Xba locus were divided into 3 groups, and the ERa gene Xba I was compared. The ERa gene Xba I was observed. The effect of polymorphism on the expression of ERa and FoxP3mRNA, and to explore the role of ER-a gene Xba I polymorphism in the pathogenesis of female GO.
Method錛，

本文編號(hào)：1777528