發(fā)布時間：2018-03-11 04:38

  本文選題：角膜新生血管　切入點：腫瘤壞死因子α　出處：《蘇州大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 背景與目的 眼堿燒傷是臨床常見的眼外傷之一,是嚴重的致盲性眼病,堿燒傷后伴隨強烈的炎癥反應(yīng),常合并角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)的形成。CNV可導致患者視力下降、改變角膜的“免疫赦免”狀態(tài),是角膜移植術(shù)后發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的高危因素。其病理過程復雜,涉及諸多因素,確切的發(fā)病機理尚未完全闡明。CNV的治療方法較多,但目前的治療效果均不太理想,因此研究CNV發(fā)病機制和探討有效的治療措施,將對防治CNV、防盲治盲都具有極其重要的現(xiàn)實意義。 TNF-α是一種主要由活化單核細胞及巨噬細胞產(chǎn)生的多能性細胞因子,可介導角膜炎和角膜潰瘍中的急性炎癥反應(yīng)及宿主防御機制,并且在角膜創(chuàng)傷修復過程中起到關(guān)鍵性作用,同時與CNV形成之間也存在緊密聯(lián)系。但目前關(guān)于TNF-α在CNV形成過程中所起到的具體作用及內(nèi)在機制仍未完全闡明,亦未見外源性TNF-α對堿燒傷CNV形成影響的報道。本課題從建立小鼠堿燒傷CNV模型著手,觀察重組鼠TNF-α對堿燒傷CNV的影響,利用免疫組織化學、RT-PCR和小鼠巨噬細胞特異剔除模型,探討TNF-α、巨噬細胞浸潤以及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)三者之間在堿燒傷CNV形成中的作用與機制。 材料與方法 1、15只BALB/c小鼠制作左眼堿燒傷誘導CNV模型,通過眼局部滴藥隨機分為100μg/ml TNF-α實驗組、500μg/ml TNF-α實驗組、0.2%透明質(zhì)酸鈉對照組,每組5只小鼠,自堿燒傷后分別給予100μg/ml、500μg/ml TNF-α或0.2%透明質(zhì)酸鈉點眼,每日2次,持續(xù)1w,堿燒傷后1d、7d、14d裂隙燈顯微鏡下觀察各組角膜的炎癥反應(yīng)、角膜穿孔及新生血管形成情況,于堿燒傷后14d處死所有小鼠,取眼球行免疫組織化學法檢測各組角膜組織中CD31的表達,計數(shù)微血管密度,比較各組之間差異,分析TNF-α對堿燒傷CNV形成的作用。 2、20只BALB/c小鼠堿燒傷后隨機分為100μg/ml TNF-α實驗組、0.2%透明質(zhì)酸鈉對照組,每組10只小鼠,自堿燒傷后分別給予100μg/ml TNF-α或0.2%透明質(zhì)酸鈉點眼,每日2次,于傷后2d、4d兩組隨機取5只小鼠處死,取角膜行RT-PCR法檢測兩組VEGF mRNA的表達情況,比較兩組之間的差異,分析TNF-α對堿燒傷角膜中VEGF表達的影響。 3、利用二氯亞甲基二磷酸脂質(zhì)體(Clodronate-liposomes, Cl2MDP-lip)腹腔注射制作小鼠巨噬細胞特異剔除模型,10只BALB/c小鼠隨機分為Cl2MDP-lip實驗組及PBS-lip對照組,每組5只小鼠。所有小鼠自堿燒傷后均給予100μg/ml TNF-α滴眼,每日2次,持續(xù)1w,所有小鼠于堿燒傷后14d拍照記錄CNV形成情況,圖像分析軟件測量CNV長度、計算CNV面積,比較兩組之間差異。分析巨噬細胞在TNF-α促進堿燒傷CNV形成中的作用。 結(jié)果 1、堿燒傷后14d 100μg/ml TNF-α實驗組CNV形成較對照組明顯增多,同時免疫組化法檢測MVD較對照組明顯增多(P0.05),而500μg/ml TNF-α實驗組與對照組之間無明顯差異。表明低劑量TNF-α能促進堿燒傷CNV形成。 2、堿燒傷后2d、4d 100μg/ml TNF-α實驗組小鼠角膜組織中VEGF mRNA的表達水平均較對照組高(P0.05)。表明TNF-α能通過上調(diào)堿燒傷角膜中VEGF的表達,促進CNV的形成。 3、Cl2MDP-lip實驗組小鼠堿燒傷后14d CNV長度、面積均較對照組明顯減少(P0.05),表明巨噬細胞剔除可顯著降低TNF-α對堿燒傷CNV形成的促進作用。 結(jié)論 1、低劑量重組鼠TNF-α具有促進堿燒傷CNV形成的作用,而在高劑量時未表現(xiàn)出明顯的促進血管新生作用。 2、低劑量TNF-α促進堿燒傷CNV形成的作用機制可能與促進巨噬細胞向角膜組織的浸潤,同時上調(diào)巨噬細胞VEGF的表達有關(guān)。 3、通過對角膜局部TNF-α表達水平的干預,可能成為臨床治療CNV一個新的途徑。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R779.1

【共引文獻】

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本文編號：1596638