本文關(guān)鍵詞：木犀草素-7-0-葡萄糖苷對心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：心血管疾病是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病,具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率等特點(diǎn),發(fā)病年齡有年輕化的趨勢。心肌損傷類型包括局部缺血性損傷、缺血再灌注損傷、缺氧損傷、心肌肥大、缺氧／復(fù)氧損傷、氧化應(yīng)激損傷、高磷血癥引起的心肌損傷、癌癥患者化療藥物引起的損傷等。其中,癌癥治療的化學(xué)療法會(huì)導(dǎo)致短期或者長期的心臟血管的并發(fā)癥。在癌癥患者化學(xué)療法誘導(dǎo)的心肌毒性的藥物中,蒽環(huán)類抗生素是主要的毒性藥物,由此限制了它的臨床應(yīng)用。而心肌細(xì)胞的營養(yǎng)缺乏在臨床上也是普遍發(fā)生的,它介導(dǎo)多種心臟局部缺血病理過程,比如冠心病和心力衰竭等,在此過程中會(huì)發(fā)生自噬的激活,最終心肌細(xì)胞存活或者死亡。從天然植物中尋找新型、高效的具有心肌保護(hù)作用的藥物仍是藥學(xué)研究的重點(diǎn)之一。中藥作用范圍廣,毒副作用少,能有效地清除氧自由基抗脂質(zhì)過氧化作用和調(diào)節(jié)鈣離子穩(wěn)定,從而保護(hù)心肌細(xì)胞損傷。青蘭屬植物為多年生草本植物,廣泛分布于我國西北地區(qū)。其地上全草所含總黃酮靜脈滴注可以有效緩解犬急性心肌缺血,縮小急性心肌梗死面積,冠脈流量明顯增加。為尋找對心肌細(xì)胞有保護(hù)作用的有效成分,開發(fā)利用該植物資源,我院天然藥化教研室對該植物地上全草進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究,通過對已提取的化合物進(jìn)行的藥理活性研究,發(fā)現(xiàn)木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin-7-O-Glucoside, LUTG)對心肌損傷有一定保護(hù)作用。前期研究表明LUTG預(yù)處理對多柔比星誘導(dǎo)的心臟毒性有顯著的保護(hù)作用,且對多柔比星的抗腫瘤活性沒有影響。但其具體的對心肌保護(hù)的作用機(jī)制尚不明確。本課題主要通過體外實(shí)驗(yàn),研究LUTG對多柔比星或饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,并探討其作用機(jī)制,為開發(fā)具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的心血管藥物奠定基礎(chǔ)。LUTG對多柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用：細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果顯示,LUTG明顯抑制多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷；DAPI及吖啶橙染色結(jié)果顯示,LUTG逆轉(zhuǎn)多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的凋亡；JC-1熒光探針檢測結(jié)果顯示,LUTG逆轉(zhuǎn)多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒體膜電勢的去極化,逆轉(zhuǎn)線粒體的損傷；Western blotting結(jié)果顯示,多柔比星處理組p-PTEN的表達(dá)明顯下降,p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表達(dá)明顯增加；而預(yù)處理LUTG (20μM),明顯上調(diào)p-PTEN的表達(dá),明顯下調(diào)p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表達(dá)。LUTG對饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用：MTT檢測結(jié)果顯示,心肌細(xì)胞的活力隨饑餓時(shí)間依賴性的降低,自噬抑制劑3-MA降低正常條件及饑餓條件下心肌細(xì)胞的活力。流式和Western blotting結(jié)果顯示,饑餓會(huì)抑制心肌細(xì)胞的周期和細(xì)胞周期蛋白cyclinD1和p21的表達(dá),并抑制p-Akt, p-mTOR的表達(dá),而上調(diào)p-ERK的表達(dá)。LUTG預(yù)處理后,MTT結(jié)果顯示,LUTG (5,10,20μM)明顯保護(hù)饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的損傷,而自噬抑制劑3-MA可阻斷LUTG對饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。Western blotting結(jié)果顯示,LUTG可增強(qiáng)饑餓條件下心肌細(xì)胞的自噬,并下調(diào)p-ERK的表達(dá)。結(jié)論：LUTG對多柔比星或饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷都有明顯的保護(hù)作用,可能通過調(diào)節(jié)Akt/mTOR及ERK信號通路而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：木犀草素-7-O-葡萄糖苷 心肌保護(hù) Akt ERK mTOR
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 符號說明14-16
• 前言16-23
• 1. 心血管疾病的現(xiàn)狀16-21
• 2. 心肌保護(hù)的研究進(jìn)展21-23
• 第一部分 木犀草素-7-O-葡萄糖苷對多柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究23-35
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 1.1 化合物23
• 1.2 細(xì)胞株23
• 1.3 試劑23-24
• 1.4 儀器設(shè)備24
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法24-27
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及凍存24-25
• 2.2 LUTG對多柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的影響25
• 2.3 LUTG對心肌細(xì)胞凋亡的影響25-26
• 2.3.1 DAPI染色檢測細(xì)胞凋亡25-26
• 2.3.2 AO染色檢測細(xì)胞凋亡26
• 2.4 LUT對線粒體膜電位的影響26-27
• 2.5 Western blotting檢測LUTG對相關(guān)蛋白表達(dá)的影響27
• 2.6 數(shù)據(jù)分析27
• 3. 試驗(yàn)結(jié)果27-32
• 3.1 LUTG對多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌損傷的影響27-28
• 3.2 LUTG對多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的凋亡的影響28-29
• 3.3 LUTG對多柔比星誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒體膜電勢的去極化的影響29-30
• 3.4 LUTG對PTEN,Akt和ERK蛋白表達(dá)的影響30-32
• 4. 討論32-35
• 第二部分 木犀草素-7-O-葡萄糖苷對饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究35-46
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 1.1 化合物35
• 1.2 細(xì)胞株35
• 1.3 試劑35-36
• 1.4 儀器設(shè)備36
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及凍存36
• 2.2 細(xì)胞活力的影響36
• 2.3 細(xì)胞周期的影響36-37
• 2.4 LUTG對細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶活性的影響37
• 2.5 Western blotting檢測相關(guān)蛋白表達(dá)的影響37
• 2.6 數(shù)據(jù)分析37
• 3. 試驗(yàn)結(jié)果37-44
• 3.1 饑餓對心肌細(xì)胞的活力的影響37-38
• 3.2 饑餓對心肌細(xì)胞的周期的影響38-39
• 3.2.1 饑餓對心肌細(xì)胞周期的影響38
• 3.2.2 饑餓對心肌細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響38-39
• 3.3 饑餓對心肌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響39-40
• 3.4 自噬抑制劑3-MA對正常及饑餓條件下心肌細(xì)胞活力的影響40
• 3.5 饑餓對Akt及ERK蛋白表達(dá)的影響40-41
• 3.6 LUTG對饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的損傷的影響41-42
• 3.7 LUTG對心肌細(xì)胞自噬的影響42-43
• 3.8 LUTG對溶酶體降解程度的影響43-44
• 3.9 LUTG對Akt,mTOR和ERK蛋白表達(dá)的影響44
• 4. 討論44-46
• 總討論46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文58-59
• 附件59-69
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李茜;連春微;方利群;劉斌;楊波;;氙氣預(yù)處理對未成熟心肌缺血/再灌注損傷及氧化應(yīng)激的影響[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年05期

2 Thekkuttuparambil Ananthanarayanan Ajith;Thankamani Gopinathan Jayakumar;;Mitochondria-targeted agents: Future perspectives of mitochondrial pharmaceutics in cardiovascular diseases[J];World Journal of Cardiology;2014年10期

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本文編號：891698