本文關(guān)鍵詞：廣西巴馬小型豬動(dòng)脈病變與ABCA1關(guān)系的初步研究

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【摘要】：大動(dòng)脈因血流速度快、血壓大等原因易出現(xiàn)內(nèi)皮損傷。膽固醇代謝物質(zhì)易粘附于損傷的血管內(nèi)膜形成脂質(zhì)沉積,血管發(fā)生堵塞及血栓形成,進(jìn)而發(fā)展成為動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)。膽固醇代謝異常是動(dòng)脈粥樣病變的主要原因。膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的限速蛋白ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Al (ABCA1)對(duì)膽固醇代謝尤為重要。ABCA1與動(dòng)脈病變之間的作用及調(diào)控關(guān)系復(fù)雜,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種microRNA參與對(duì)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)及動(dòng)脈粥樣硬化的調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)采用廣西巴馬小型豬為實(shí)驗(yàn)材料,選取常規(guī)飼養(yǎng)豬4頭,飼以常規(guī)飼料作為對(duì)照組；選取高脂高糖飼喂豬,9頭飼以高脂高糖飼料作為實(shí)驗(yàn)1組,5頭飼以高脂高糖高膽固醇作為實(shí)驗(yàn)2組。實(shí)驗(yàn)為期3個(gè)月,其間每月檢測(cè)血液生理生化指標(biāo),實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)動(dòng)脈病理變化情況�？寺V西巴馬小型豬ABC Al基因CDs并分析其生物學(xué)信息。檢測(cè)ABCA1 mRNA及蛋白在各組實(shí)驗(yàn)豬主動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈中的表達(dá)情況,同時(shí)檢測(cè)以ABCA1為靶基因的niRNA-33a,miRNA-758在各組實(shí)驗(yàn)豬肝臟中的表達(dá)情況。構(gòu)建ABCA1真核表達(dá)載體并驗(yàn)證其功能。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)來(lái)探討動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中ABCA1與膽固醇代謝的變化及影響ABCA1表達(dá)的microRNAs的變化情況,并為制作轉(zhuǎn)ABCA1廣西巴馬小型豬奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：(1)實(shí)驗(yàn)2組血清總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平均呈上升趨勢(shì),實(shí)驗(yàn)1組與對(duì)照組血清總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平無(wú)明顯差異。(2)主動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈制作病理切片HE染色檢驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組各動(dòng)脈均出現(xiàn)不同程度病變。實(shí)驗(yàn)1組各動(dòng)脈內(nèi)膜增厚,中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂。實(shí)驗(yàn)2組各動(dòng)脈病變較實(shí)驗(yàn)1組嚴(yán)重,內(nèi)膜不平整,中膜增厚并出現(xiàn)巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞。(3)實(shí)驗(yàn)獲得的廣西巴馬小型豬ABCA1 CDs全長(zhǎng)2856bp,編碼961個(gè)氨基酸,成熟蛋白無(wú)信號(hào)肽,ATP轉(zhuǎn)運(yùn)體活性中心位于第602-834位氨基酸。(4) qRT-PCR結(jié)果顯示：在主動(dòng)脈和頸動(dòng)脈,實(shí)驗(yàn)2組ABCA1 mRNA表達(dá)量顯著高于實(shí)驗(yàn)1組和對(duì)照組(P0.05)；在腹主動(dòng)脈,實(shí)驗(yàn)2組和實(shí)驗(yàn)1組ABCA1 mRNA表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組(P0.05)。免疫組化半定量分析結(jié)果顯示：在主動(dòng)脈,ABCA1蛋白表達(dá)量實(shí)驗(yàn)2組實(shí)驗(yàn)1組對(duì)照組,但差異不顯著；在頸動(dòng)脈,實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組ABCAl蛋白的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P0.05)；在腹主動(dòng)脈,實(shí)驗(yàn)2組ABCAl蛋白表達(dá)量顯著高于實(shí)驗(yàn)1組(P0.05),實(shí)驗(yàn)1組顯著高于對(duì)照組(P0.05)。免疫組化定位ABCAl蛋白在動(dòng)脈內(nèi)膜增厚區(qū)大量表達(dá),且表達(dá)量隨病變程度的加劇而升高。(5) qRT-PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)2組肝臟中ABCA1表達(dá)量顯著高于對(duì)照組1和對(duì)照組(P0.05)cmiR-33a在實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組肝臟中的表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組(P0.05)。miR-758在實(shí)驗(yàn)1組肝臟中表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P0.05),在實(shí)驗(yàn)2組中顯著低于對(duì)照組(P0.05)。(6)轉(zhuǎn)pEGFP-Nl-ABCAl的PK-15細(xì)胞可檢測(cè)到綠色熒光,且ABCAl mRNA水平顯著上升。在胞質(zhì)注射的豬卵母細(xì)胞分裂期和囊胚期均能檢測(cè)到綠色熒光。結(jié)論：高脂高糖和高脂高糖高膽固醇均可誘導(dǎo)廣西巴馬小型豬動(dòng)脈病變,后者引發(fā)的病變更為嚴(yán)重,說(shuō)明高水平膽固醇可加速動(dòng)脈病變進(jìn)程；病變區(qū)ABCAl表達(dá)量更高,說(shuō)明ABCAl主要在病變區(qū)發(fā)揮功能；高脂高糖可引發(fā)miRNA-33a下調(diào),高膽固醇則可進(jìn)一步引發(fā)mRNA-758的下調(diào),以提高ABCA1的表達(dá),以將多余的大量膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的pEGFP-N1-ABCAl真核表達(dá)載體能夠?yàn)楹罄m(xù)構(gòu)建轉(zhuǎn)ABCAl基因的廣西巴馬小型豬奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：廣西巴馬小型豬 膽固醇 動(dòng)脈病變 ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1 MircoRNA 真核表達(dá)載體
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 綜述11-20
• 1.1 動(dòng)脈粥樣硬化疾病的現(xiàn)狀11
• 1.2 動(dòng)脈病變及其誘因11-13
• 1.3 膽固醇代謝與動(dòng)脈病變關(guān)系13-14
• 1.4 ABCA1基因與膽固醇14-18
• 1.5 廣西巴馬小型豬18-19
• 1.6 本實(shí)驗(yàn)的目的及意義19-20
• 第二章 廣西巴馬小型豬高脂高糖高膽固醇飼喂實(shí)驗(yàn)20-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析22-27
• 2.4 討論27-29
• 第三章 廣西巴馬小型豬ABCA1生物學(xué)信息分析與表達(dá)量檢測(cè)29-52
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料29-31
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法31-41
• 3.2.1 廣西巴馬小型豬ABCA1生物學(xué)信息分析31-36
• 3.2.2 廣西巴馬小型豬ABCA1表達(dá)量檢測(cè)36-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析41-51
• 3.4 討論51-52
• 第四章 廣西巴馬小型豬動(dòng)脈病變過(guò)程中調(diào)控ABCA1的miRNA-33a及miRNA-758的表達(dá)量檢測(cè)52-57
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法52-54
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析54-56
• 4.3 討論56-57
• 第五章 廣西巴馬小型豬ABCA1真核載體構(gòu)建57-69
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法57-63
• 5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析63-67
• 5.3 討論67-69
• 第六章 結(jié)論69-70
• 參考文獻(xiàn)70-76
• 附錄176-78
• 縮略詞(Abbreviation)76-78
• 附錄278-82
• 致謝82-83
• 發(fā)表論文83

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