目的 microRNA-133a(miR-133a)參與動脈粥樣硬化(AS)病理過程的具體機(jī)制不詳。文中旨在探究miR-133a參與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控過程。方法培養(yǎng)人冠狀內(nèi)皮細(xì)胞(HCAECs),分別給予不同濃度(5、15、25、50、75μg/mL)的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)處理12、24 h, MTT法檢測細(xì)胞活力,篩選文獻(xiàn)證實靶向調(diào)節(jié)抗凋亡蛋白B淋巴細(xì)胞瘤因子2-特大型(Bcl-xl)的miRNA。轉(zhuǎn)染細(xì)胞48 h后分為:無義序列組(無義序列NC)、過表達(dá)組(過表達(dá)miR-133a mimics)、沉默無義序列+誘導(dǎo)組(沉默無義序列in NC+ox-LDL誘導(dǎo)HCAECs)、miRNA沉默+誘導(dǎo)組(miR-133a敲減inhibitor+ox-LDL誘導(dǎo)HCAECs)。Western blot法檢測抗凋亡蛋白Bcl-xl及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)及沉默miR-133a,觀察其對靶基因Bcl-xl蛋白表達(dá)及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果 MTT法檢測顯示,ox-LDL濃度25、50μg...

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【文章目錄】：
0 引 言
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 細(xì)胞處理
    1.4 細(xì)胞活力檢測
    1.5 miRNA篩選
    1.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.7 細(xì)胞凋亡檢測
    1.8 qRT-PCR檢測
    1.9 Western blot分析
    1.10 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 MTT法檢測細(xì)胞活力
    2.2 qRT-PCR結(jié)果
    2.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率
    2.4 Bcl-xl及cleaved-caspase3蛋白表達(dá)
3 討 論



本文編號：3943926