【摘要】：目的:研究博來霉素(bleomycin,BLM)聯合野百合堿(monocrotaline,MCT)模擬的系統性硬化癥相關肺動脈高壓(systemic sclerosis associated pulmonary arterial hypertension,SSc-PAH)兔模型中巨噬細胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的作用。方法:研究1:將實驗雄性家兔50只按隨機數字表分為5組,各組10只,具體如下,A組:溶劑對照組,B組:大劑量MCT組,C組:小劑量MCT組,D組:小劑量MCT聯合BLM組,E組:單藥BLM組。B組與C組分別一次性腹腔注射1%MCT溶液60 mg/kg、40 mg/kg,D組一次性腹腔注射1%MCT溶液40mg/kg,每天腹腔注射BLM溶液100 ul/只,E組:每天腹腔注射BLM溶液100ul/只,溶劑對照組予以等體積量溶劑(采用無水乙醇與生理鹽水2:8比例混合)腹腔注射。3周后麻醉解剖取材,測量肺動脈壓力,右心室肥大指數(Right ventricular hypertrophy index,RVHI),皮膚、肺動脈干及肺組織石蠟切片制作及HE染色觀察病理改變。研究2:30只健康雄性家兔,隨機分為3組:分別為溶劑對照組、模型組、MIF靶向抑制組,每組10只。模型組按上述實驗1方法造模,MIF靶向抑制組在造模的同時予以MIF靶向抑制劑ISO-1 0.66 mg/(kg·d)腹腔注射,溶劑對照組每日腹腔注射等體積溶劑,觀察動物的一般情況,21天后,檢測所有動物的右心室肥大指數以及肺動脈壓力,并對皮膚、肺動脈干及肺組組進行HE染色,Western blotting及免疫組化檢測肺組織中MIF的表達。結果:研究1:1、一般情況:BCD三組注射藥物10天后開始出現毛發(fā)暗淡缺少光澤,呼吸頻率變快,活動的范圍及次數減少,食欲有所下降。從第16天起,DE兩組相繼出現腹部注射區(qū)域皮膚部分增厚、變硬、彈性差,未見兔毛。A組未出現上述改變,毛發(fā)、活動量、飲水進食量、呼吸等情況同前無明顯變化,體重隨時間增加。小劑量BLM聯合MCT組共死亡2只,造模成功率為80%;2、與A、E兩組對比,B、C、D組右心室肥大指數及平均肺動脈壓力明顯增高,差異有統計學意義;3、病理:DE兩組皮膚真皮層增厚,毛囊及附屬腺體減少、萎縮甚至消失,膠原纖維明顯增多、增粗、排列緊密,脂肪組織減少,被膠原纖維所包繞、代替,ABC組均未出現上述變化。與AE兩組相比,B、C、D組肺小動脈明顯增厚、管腔狹窄,肌型肺小動脈中膜明顯增厚,肺組織可見炎癥細胞的浸潤;AE兩組肺組織及肺動脈干結構正常,無上述改變。研究2:1、與對照組相比,模型組及精神狀態(tài)差、活動量減少,飲水進食減少,毛發(fā)無光澤,呼吸急促,注射部位皮膚局部增厚、彈性變差。MIF靶向抑制組皮毛光澤度一般,活動有所減少,注射部位皮膚較對照組變硬,但較模型組柔軟,彈性一般。2、與對照組相比,模型組及MIF靶向抑制組右心室肥大指數及平均肺動脈壓力明顯增高,具有統計學差異。模型組皮膚真皮層增厚,皮膚附屬器減少,肺組織及間質可見炎性細胞的浸潤,肺動脈干及肺小動脈管壁增厚,管腔狹窄,MIF靶向抑制組較正常對照組增厚,較模型組有所減輕。3、Western blotting顯示:模型組中肺組織MIF蛋白高表達,與對照組及MIF靶向抑制組比較差異具有統計學意義,MIF靶向抑制組MIF蛋白表達下調,相比對照組及模型組具有統計學意義。4、免疫組化顯示:MIF在模型組肺組織高表達,且位于肺小動脈內膜,MIF靶向抑制組結果顯示MIF表達下調。結論:1、博來霉素聯合野百合堿(40 mg/kg)可成功模擬兔SSc-PAH模型,較大劑量MCT(60 mg/kg),使用40 mg/kg的MCT降低了其死亡率,提高了成功率。2、MIF在兔SSc-PAH模型肺組織中高表達,靶向抑制MIF后,MIF表達下調,提示MIF在兔SSc-PAH模型發(fā)病機制中起重要作用。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R593.2;R544.1
【圖文】：

0 5 10 15 20 251.21.4時 間 （天）體圖 4 各組右心室肥大指數比較劑量 MCT、聯合組相比 P<0.05,*與對照組相比 P<0.01,#表示與大劑劑量 MCT、聯合組相比 P<0.01結構變化皮膚 HE 染色病理示：DE 組皮膚真皮層增厚伴有真皮下層附屬腺體減少、萎縮甚至消失，膠原纖維明顯增多、增織減少，被膠原纖維所包繞、代替，ABC 組均未出現上均為 10 ）。

0 5 10 15 20 251.21.4時 間 （天）體圖 4 各組右心室肥大指數比較劑量 MCT、聯合組相比 P<0.05,*與對照組相比 P<0.01,#表示與大劑劑量 MCT、聯合組相比 P<0.01結構變化皮膚 HE 染色病理示：DE 組皮膚真皮層增厚伴有真皮下層附屬腺體減少、萎縮甚至消失，膠原纖維明顯增多、增織減少，被膠原纖維所包繞、代替，ABC 組均未出現上均為 10 ）。

圖 7 C 組實驗兔皮膚 圖 8 D 組實驗兔皮膚 圖 9 E 組實驗兔皮膚2.2.6 肺動脈干結構變化各組肺動脈干病理如下：BCD 組肺動脈干管腔明顯增厚、狹窄，肌型肺小動脈中膜明顯增厚，管壁及血管周圍有大量炎性細胞浸潤。AE 組實驗兔肺動脈干無上述變化，結構正常。如圖 10-14（均為 10 ）。圖 10 A 組實驗兔肺動脈 圖 11 B 組實驗兔肺動脈

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 羅妍;王遷;;系統性硬化癥動物模型[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應雜志;2014年03期

2 馬凱;邢泉生;邢介龍;泮思林;;不同劑量野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓模型的實驗研究(英文)[J];現代生物醫(yī)學進展;2013年21期

3 張芳;謝悅;張昊;王偉;;結締組織病相關肺動脈高壓模型的建立[J];中華風濕病學雜志;2012年03期

相關博士學位論文 前1條

1 王為;結締組織病相關肺動脈高壓的血清標記物研究[D];北京協和醫(yī)學院;2010年

本文編號：2786435