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超聲靶向破碎微泡對(duì)心肌梗死犬心肌微環(huán)境的影響

發(fā)布時(shí)間:2020-06-04 07:04
【摘要】:為了研究超聲靶向破碎微泡對(duì)犬心肌梗死模型局部心肌微環(huán)境的影響。將10只犬隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組,每組5只犬,結(jié)扎犬左前降支,建立心肌梗死模型。建立心肌梗死模型后1周,將實(shí)驗(yàn)組每只模型犬用脈沖超聲(強(qiáng)度為1.0 W/cm2,頻率為1 MHz)經(jīng)胸輻照心肌,輻照時(shí)間共為10 min,同時(shí)靜脈注入2 m L超聲微泡。按照上述方法,每隔2 d處理一次,一共處理3次。對(duì)照組中的模型犬不經(jīng)預(yù)處理。在所有犬心肌梗死模型建立后兩周左右處死所有實(shí)驗(yàn)犬,取出心臟,于心肌梗死周邊區(qū)域選取相應(yīng)心肌組織,并送檢。所取組織均采用免疫組織化學(xué)染色法、Western blotting法及定量實(shí)時(shí)PCR法分別從蛋白以及基因水平測(cè)量局部心肌組織內(nèi)VCAM-1、VEGF、SDF-1和IL-1β的含量,從而探討超聲靶向輻照破碎微泡對(duì)犬心肌梗死模型局部心肌微環(huán)境的影響。免疫組織化學(xué)染色法及Western blotting法從蛋白水平定性和半定量觀察到實(shí)驗(yàn)組中梗死周邊區(qū)心肌分泌的VCAM-1、VEGF、SDF-1和IL-1β量明顯多于對(duì)照組心肌梗死周邊區(qū);定量實(shí)時(shí)PCR法從基因水平定量分析檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組內(nèi)梗死周邊區(qū)心肌分泌VCAM-1、VEGF、SDF-1和IL-1β明顯高于對(duì)照組中心肌梗死周邊區(qū)(p0.05)。采用一定量的超聲被動(dòng)靶向輻照破碎微泡能夠引發(fā)心肌內(nèi)源性生物活性物質(zhì)的分泌,促進(jìn)VCAM-1、VEGF、SDF-1和IL-1β的高表達(dá),從而使局部心肌微環(huán)境得到一定改變,有利于干細(xì)胞移植治療缺血性心臟病。
【圖文】:

心肌組織,免疫組織化學(xué)染色,實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組


RT-qPCR分析可以觀察到經(jīng)過超聲輻照破碎微泡的基礎(chǔ),心肌局部組織分泌的有利細(xì)胞因子VCAM-1量提高了6倍,SDF-1與VEGF均提高了4倍多,而有害細(xì)胞因子IL-1β提高接近5倍(圖3)。因此,在明顯提高粘附因子、趨化因子和血管生長因子有利于干細(xì)胞的貼壁、遷移以及分化增殖的情況下,又不至于過度的炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生損害干細(xì)胞。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)一定量的超聲靶向輻照破碎微泡處理后能夠精準(zhǔn)的改變心肌梗死區(qū)域的微環(huán)境,是有利于干細(xì)胞遷移、存活、分化和增殖的。2討論本試驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)心肌梗死犬模型建立一周圖1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各心肌組織免疫組織化學(xué)染色(×400)注:實(shí)驗(yàn)組中圖(A~D)中陽性棕黃色顆粒均較對(duì)照組中圖(a~d)明顯增多;實(shí)驗(yàn)組中VEGF,SDF-1,VCAM-1,IL-1均呈強(qiáng)陽性表達(dá)Figure1Theimmunohistochemicalstainingofexperimentalgroupandthecontrolgroup(×400)Note:Immunohistochemistrystudyshowedhigherpositiveex-pression(A~D)ofVEGF,SDF-1,VCAM-1,IL-1thanthatintreatmentgroup(a~d);HigherpositiveexpressionofVEGF,SDF-1,VCAM-1,IL-1intreatmentgroupthanthatincontrolgroup圖2Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)注:實(shí)驗(yàn)組中各細(xì)胞因子的條帶表達(dá)灰度均比對(duì)照組的強(qiáng)Figure2WesternblottinganalysescytokinesexpressionNote:Higherexpressionofthesecytokinesintheexperimentgroupwashigherthanthatinthecontrolgroup圖3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子和生長因子注:實(shí)驗(yàn)組中各細(xì)胞因子的量表達(dá)明顯比對(duì)照組多(p<0.05)Figure3RT-qPCRmeasurementofcytokinesandgrowthfactorsNote:Theexpressionofcytokinesofdifferentcellsintheexper-imentgroupwassignificantlyhighe

細(xì)胞因子表達(dá),細(xì)胞因子,實(shí)驗(yàn)組,灰度


圖1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各心肌組織免疫組織化學(xué)染色(×400)注:實(shí)驗(yàn)組中圖(A~D)中陽性棕黃色顆粒均較對(duì)照組中圖(a~d)明顯增多;實(shí)驗(yàn)組中VEGF,SDF-1,VCAM-1,IL-1均呈強(qiáng)陽性表達(dá)Figure1Theimmunohistochemicalstainingofexperimentalgroupandthecontrolgroup(×400)Note:Immunohistochemistrystudyshowedhigherpositiveex-pression(A~D)ofVEGF,SDF-1,VCAM-1,IL-1thanthatintreatmentgroup(a~d);HigherpositiveexpressionofVEGF,SDF-1,VCAM-1,IL-1intreatmentgroupthanthatincontrolgroup圖2Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)注:實(shí)驗(yàn)組中各細(xì)胞因子的條帶表達(dá)灰度均比對(duì)照組的強(qiáng)Figure2WesternblottinganalysescytokinesexpressionNote:Higherexpressionofthesecytokinesintheexperimentgroupwashigherthanthatinthecontrolgroup圖3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子和生長因子注:實(shí)驗(yàn)組中各細(xì)胞因子的量表達(dá)明顯比對(duì)照組多(p<0.05)Figure3RT-qPCRmeasurementofcytokinesandgrowthfactorsNote:Theexpressionofcytokinesofdifferentcellsintheexper-imentgroupwassignificantlyhigherthanthatinthecontrolgroup(p<0.05)超聲靶向破碎微泡對(duì)心肌梗死犬心肌微環(huán)境的影響TheChangesofMyocardialMicroenvironmentInducedbyUTMDinaCanineMyocardialInfarctionModel4530

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