【摘要】：一直以來動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)性心臟病就是人類致傷、致殘甚至致亡的頭號(hào)殺手。AS性心臟病,簡稱冠心病(coronary heart disease,CHD),其發(fā)病機(jī)制紛繁冗雜。眾所周知,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和氧化應(yīng)激(oxidative stress,OS)均參與了其中,而氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)引起AS的病理作用已經(jīng)成為共識(shí),其已被證實(shí)可以引起培養(yǎng)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、OS反應(yīng)和細(xì)胞損傷及凋亡。目前防止ox-LDL引起的心肌損傷的治療方法未達(dá)理想療效,尚需要新的臨床或動(dòng)物研究來填補(bǔ)這一未竟的領(lǐng)域。對(duì)氧磷酶(paraoxonase,PON)是一類抗氧化酶,PON 2是其中的一種,主要分布在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum,ER),在ER內(nèi)發(fā)揮抗氧化作用。研究發(fā)現(xiàn)PON2基因缺陷的巨噬細(xì)胞,OS和ERS水平明顯增強(qiáng),而過表達(dá)PON2,可顯著降低細(xì)胞OS和ERS水平。上述結(jié)果提示PON2活性與OS和ERS程度密切相關(guān)。目前關(guān)于PON2的研究多集中在腎臟、中樞神經(jīng)和免疫系統(tǒng),尚未進(jìn)行心肌細(xì)胞的系統(tǒng)研究。本研究旨在通過檢測(cè)PON2能否抑制ox-LDL誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞程序性死亡或凋亡,探討PON2發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制。方法:利用ox-LDL干預(yù)乳鼠心肌細(xì)胞(neonatal rat ventricular cells,NRVCs),并利用SOD類似物Mn(III)TBAP、e IF2α去磷酸化抑制劑Salubrinal、抗氧化酶PON2多肽提前預(yù)處理,將心肌細(xì)胞分成對(duì)照組、ox-LDL組、Salubrinal+ox-LDL組、PON2+ox-LDL組、Mn(III)TBAP+ox-LDL組。然后用MTT檢測(cè)心肌細(xì)胞的活性(n=6);caspase-3/7活性試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡(n=6);western blot檢測(cè)OS蛋白Nox2/gp91phox和p47phox,ERS凋亡蛋白caspase-12和e IF2αphox的表達(dá)及PON2蛋白的表達(dá)(n=4)。結(jié)果:與對(duì)照組比較,ox-LDL明顯降低心肌細(xì)胞活性(P0.01)顯著增加心肌細(xì)胞凋亡(P0.01);與ox-LDL組相比,PON2,salubrinal和Mn(Ⅲ)TBAP干預(yù)后,心肌細(xì)胞活性顯著升高(P0.01),心肌細(xì)胞凋亡顯著下降(P0.01)。與對(duì)照組相比,ox-LDL顯著增加PON2蛋白表達(dá)(P0.05)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白e IF-2αphox(P0.01)、caspase-12(P0.01)和氧化應(yīng)激蛋白Nox2/gp91phox(P0.01)、p47phox表達(dá)(P0.01);與ox-LDL組相比,PON2干預(yù)后,PON2蛋白表達(dá)明顯增加(P0.05);e IF-2αphox(P0.01),caspase-12(P0.05),Nox2/gp91phox(P0.05)和p47phox(P0.05)蛋白表達(dá)明顯降低;與PON2作用類似,salubrinal干預(yù)后,e IF-2αphox(P0.05)和caspase-12(P0.01)蛋白表達(dá)明顯降低,Mn(Ⅲ)TBAP干預(yù)后,Nox2/gp91phox(P0.01)和p47phox(P0.01)蛋白表達(dá)明顯降低,二者均顯著增加PON2表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:1.PON2可增加ox-LDL誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞活性,抑制ox-LDL誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡;2.PON2通過代償性升高抑制ox-LDL引起的OS反應(yīng)而減輕心肌細(xì)胞損傷;3.PON2通過代償性升高抑制ox-LDL引起的ERS反應(yīng)而減輕心肌細(xì)胞損傷。綜上所述,PON2可能是能通過代償性升高抑制OS和ERS反應(yīng)從而對(duì)ox-LDL導(dǎo)致的心肌細(xì)胞程序性死亡或凋亡發(fā)揮保護(hù)作用。此結(jié)果有望對(duì)防治ox-LDL引起的心肌損傷提供新的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2692427