【摘要】：目的:糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病的并發(fā)癥之一,mi RNAs的改變與DCM的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),通過(guò)研究高濃度葡萄糖干預(yù)的H9C2心肌細(xì)胞的增殖活性、凋亡及細(xì)胞內(nèi)mi R-26a/b表達(dá)的變化,進(jìn)一步過(guò)表達(dá)/沉默mi R-26a后探索高濃度葡萄糖干預(yù)的心肌細(xì)胞增殖活性、凋亡改變,從而揭示mi R-26與DCM的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。方法:采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度葡萄糖(5.5 mmol/l,15 mmol/l,25 mmol/l,35mmol/l)干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞不同時(shí)間后細(xì)胞增殖活性的變化;采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)不同濃度葡萄糖干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞凋亡率的變化;采用RT-PCR法檢測(cè)不同濃度葡萄糖干預(yù)的H9C2心肌細(xì)胞內(nèi)mi R-26a/b的水平、高濃度葡萄糖(25mmol/l)干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞不同時(shí)間后mi R-26a/b表達(dá)水平的變化及C57BL/6J小鼠和ob/ob小鼠心臟、脂肪、肝等組織中mi R-26b水平;采用CCK-8法檢測(cè)mi R-26a過(guò)表達(dá)及沉默后高濃度葡萄糖(25 mmol/l)干預(yù)下的H9C2心肌細(xì)胞增殖活性的改變;采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)mi R-26a過(guò)表達(dá)及沉默后高濃度葡萄糖(25mmol/l)干預(yù)下的H9C2心肌細(xì)胞凋亡率的變化。結(jié)果:1.CCK-8法檢測(cè)不同濃度葡萄糖干預(yù)的H9C2心肌細(xì)胞增殖活性結(jié)果表明:與5.5mmol/l葡萄糖組比較,15 mmol/l、25 mmol/l及35 mmol/l 3組細(xì)胞增殖活性均顯著增高(p0.05);2.流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果表明:與5.5 mmol/l葡萄糖組相比,15mmol/l、25 mmol/l及35 mmol/l組的心肌細(xì)胞凋亡率均顯著下降(p0.05);3.RT-PCR法檢測(cè)不同濃度葡萄糖干預(yù)的H9C2心肌細(xì)胞內(nèi)mi R-26a/b水平結(jié)果表明:高濃度葡萄糖可下調(diào)H9C2心肌細(xì)胞內(nèi)mi R-26a/b的表達(dá),并隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng),下調(diào)更加顯著(p0.05);4.在C57BL/6J小鼠心臟組織中mi R-26b表達(dá)水平最高,與C57BL/6J小鼠相比,ob/ob小鼠心臟及白色脂肪組織中mi R-26b水平明顯降低(p0.05);5.mi R-26a過(guò)表達(dá)可抑制高濃度葡萄糖干預(yù)的心肌細(xì)胞的增殖活性(p0.05),沉默mi R-26a可增強(qiáng)H9C2心肌細(xì)胞增殖活性(p0.05);mi R-26a過(guò)表達(dá)及沉默均對(duì)H9C2心肌細(xì)胞凋亡狀態(tài)無(wú)明顯影響(p0.05)。結(jié)論:1.高濃度葡萄糖可促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖,降低細(xì)胞凋亡,引起mi R-26a/b表達(dá)水平下調(diào);2.miR-26a可影響心肌細(xì)胞增殖,并不影響細(xì)胞凋亡;3.miR-26可能通過(guò)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞增殖過(guò)程參與DCM的發(fā)生發(fā)展。
【圖文】：

1 不同濃度葡萄糖組干預(yù)不同時(shí)間 H9C2 心肌細(xì)胞增殖活性的比較The proliferative activity of H9C2 cardiomyocytes after treated with diconcentrations of glucose for different hours葡萄糖對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響濃度葡萄糖干預(yù) H9C2 心肌細(xì)胞后,為了驗(yàn)證不同濃度葡萄胞凋亡狀態(tài)的影響，現(xiàn)采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀與 5.5 mmol/l 葡萄糖組相比，15 mmol/l、25 mmol/l 及 35細(xì)胞凋亡率均顯著下降（p<0.001）。

與 5.5 mmol/L 葡萄糖組相比，，**** p ＜0.0001, *** p ＜0.001濃度葡萄糖干預(yù)對(duì) H9C2 心肌細(xì)胞凋亡的影響（A：不同濃度葡萄糖干預(yù)對(duì) H9C亡率的比較；B：空染陰性對(duì)照細(xì)胞凋亡流式圖；C-F：5.5 mmol/l 葡萄糖組, 15 mm葡萄糖組, 25 mmol/l 葡萄糖組, 35 mmol/l 葡萄糖組細(xì)胞凋亡流式圖） The apoptosis ratio of H9C2 cardiomyocytes after treated with different concentrationA：Apoptosis ratio of H9C2 cardiomyocytes after treated with different concentrationB：Negative control cell without staining; C-F: 5.5mmol/l Glu group, 15mmol/l Glu gr25mmol/l Glu group, 35mmol/l Glu group）同濃度葡萄糖對(duì)心肌細(xì)胞中 miR-26a 表達(dá)的影響用不同濃度葡萄糖干預(yù) H9C2 心肌細(xì)胞 48 h后,為了驗(yàn)證不同濃度葡萄糖iR-26a 表達(dá)水平的變化，現(xiàn)采用 RT-PCR 法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi) miR-26a 水圖 3 所見(jiàn)：與 5.5 mmol/l 葡萄糖組相比，25 mmol/l 及 35 mmol/l 葡萄糖 miR-26a 表達(dá)水平下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），而 15 mmol/l 葡胞內(nèi) miR-26a 有下調(diào)趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R542.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2675162