【摘要】：背景和目的肺血管中膜增厚是肺動脈高壓肺血管重構病理改變的重要原因,可由肺動脈平滑肌細胞(pulmonary artery smooth muscle cell,PASMCs)增殖、分泌活性增強而導致。細胞衰老是以細胞生長、增殖能力不可逆喪失為主要特征的一個過程。文獻報道,在慢性阻塞性肺疾病肺血管重構中PASMCs衰老顯著增加,但機制尚未闡明。我們預實驗發(fā)現,低氧處理后,β-半乳糖苷酶染色的陽性細胞顯著增加以及衰老指標p21的表達顯著上調。這就表明,低氧可促進PASMCs衰老。然而衰老的PASMCs是如何促進肺動脈平滑肌細胞增殖尚不清楚。研究證實,衰老的主動脈平滑肌細胞通過分泌SASP(IL-1α)促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展;衰老也可上調主動脈平滑肌細胞中IL-6的分泌和CCL2的產生,引起慢性炎癥促進動脈粥樣硬化。重要的是,在慢性阻塞性肺疾病中PASMCs衰老伴隨IL-6表達上調,進而參與調節(jié)PASMCs增殖。我們預實驗發(fā)現:低氧誘導的PASMCs衰老中,伴隨IL-6表達顯著增高。因此,我們推測在低氧誘導的PASMCs衰老中,衰老的PASMCs可通過旁分泌IL-6促進PASMCs增殖,進而促進PH肺血管重構。本課題通過細胞培養(yǎng)實驗證明PASMCs衰老在低氧誘導PH肺血管重構中的重要作用并進一步驗證衰老PASMCs可旁分泌IL-6促進PASMCs增殖,導致PH肺血管重構。以PASMCs衰老可能是肺動脈高壓肺血管重構一種新的病理生理機制為切入點,揭示PASMCs衰老對低氧誘導PH肺血管重構的作用。為進一步研究如何減輕肺動脈平滑肌細胞衰老來抑制肺動脈平滑肌細胞增殖,進而抑制肺動脈高壓肺血管重構提供新的策略。方法采用第3代至第8代SD大鼠原代PASMCs,分別在常氧(21%O_2)和低氧(3%O_2)處理48 h,建立PASMCs低氧模型。(1)使用免疫組化法鑒定平滑肌α-肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)。(2)細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測細胞內β-半乳糖苷酶活性,并計算陽性率;Western blot檢測衰老指標p21、p16蛋白水平,檢測細胞衰老情況。(3)CCK8檢測PASMCs增殖率;Western blot檢測增殖細胞核抗原(PCNA)蛋白表達水平。qPCR法檢測增殖細胞核抗原(PCNA)mRNA表達水平。(4)ELISA試劑盒檢測細胞上清液IL-6旁分泌情況。結果(1)分離培養(yǎng)的PASMCs,3天后可見PASMCs貼壁生長,形態(tài)呈長梭形,7天后呈典型的“峰-谷”狀生長,10天左右細胞達90%以上的融合。在倒置顯微鏡下對細胞進行形態(tài)學分析以及免疫組化法的陽性結果判斷培養(yǎng)的原代細胞為PASMCs;(2)低氧組(3%O_2)較常氧組相比,細胞內β-半乳糖苷酶陽性率明顯升高(P0.05);衰老指標p21、p16蛋白表達水平明顯增加(P0.05,P0.01);(3)較常氧組相比,低氧組(3%O_2)PASMCs的增殖率增加,PCNA蛋白表達水平明顯上調(P0.05);低氧組(3%O_2)PASMCs中PCNA mRNA表達水平明顯上調(P0.05);(4)低氧組(3%O_2)中細胞上清液IL-6表達較常氧組明顯上調(P0.01);(5)IL-6抑制劑AX-024處理后,細胞上清液IL-6表達水平明顯下調(P0.001),且處理濃度為10 nmoL/mL時具有最佳抑制作用(P0.05)。結論1.低氧可誘導PASMCs衰老。2.衰老的PASMCs可通過分泌細胞因子IL-6促進PASMCs增殖。
【圖文】：

PH 肺血管重構的影響。即低氧誘導 PH 中 PASMCs 的衰老增加，衰老的PASMCs 可通過分泌衰老相關分泌表型 IL-6 促進 PASMCs 增殖，從而促進PH 肺血管重構，為防治 PH 肺血管重構提供新的靶點和新的策略（圖1）。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R544.1

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 許亞楓;;感悟生命 關注社會——以《細胞的衰老和凋亡》教學為例[J];湖北教育(教育教學);2017年03期

2 崔志潭;張鐵民;蘇長海;;腦老化的形態(tài)學研究——藍斑的變化與衰老(動物實驗)[J];天津醫(yī)藥;1987年06期

3 Menconi M;胡冰;;前列腺素、衰老與血管[J];國外醫(yī)學(老年醫(yī)學分冊);1988年03期

4 崔志潭,張鐵民;神經系統(tǒng)衰老的形態(tài)學研究[J];老年學雜志;1989年S1期

5 張存泰;陶軍;田小利;洪華山;;血管衰老臨床評估與干預中國專家共識(2018)[J];中華老年病研究電子雜志;2019年01期

6 黃甜;;p16~(Ink4a)陽性衰老細胞的清除延遲衰老[J];農業(yè)生物技術學報;2011年06期

7 方陵生;;清除衰老細胞 延長“黃金年代”[J];中老年保健;2012年04期

8 王佳賀;;前言——衰老相關機制的研究進展[J];實用老年醫(yī)學;2018年12期

9 徐廣琪;;芻議老年病的特征及其與衰老的關系[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2018年29期

10 奇卡;;人為什么會衰老[J];家庭科技;2019年03期

相關會議論文 前10條

1 楊璐;;川芎嗪局部清除小鼠髓內衰老骨髓間充質細胞可促進髓腔內抗炎因子及促血管微環(huán)境的形成[A];2019楚天骨科高峰論壇暨第二十六屆中國中西醫(yī)結合骨傷科學術年會論文集[C];2019年

2 呂曉鳳;蔣曉剛;白俊海;毛澤斌;;IGFBP-3基因在衰老細胞中的表達調控研究[A];第七屆全國老年醫(yī)學學術會議暨海內外華人老年醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2004年

3 杜朋;樊飛躍;孟愛民;;衰老細胞組織內累積與特發(fā)性肺纖維化[A];第十三屆中國實驗動物科學年會論文集[C];2017年

4 陳暢;;蛋白質巰基的氧化還原修飾與衰老[A];中國生物化學與分子生物學會2019年全國學術會議暨學會成立四十周年論文集[C];2019年

5 鄧洋;閆萍;;MTA對衰老小鼠骨髓巨噬細胞分泌細胞因子的影響[A];第十次全國老年口腔醫(yī)學學術年會論文匯編[C];2015年

6 彭小冬;張宗玉;童坦君;;衰老相關p21~(WAF1)的高表達并非與p53無關[A];中國生物化學與分子生物學會第八屆會員代表大會暨全國學術會議論文摘要集[C];2001年

7 管博文;楊銀;孟愛民;;建立博來霉素誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7衰老細胞模型[A];第十三屆中國實驗動物科學年會論文集[C];2017年

8 楊東麗;張宗玉;童坦君;;衰老相關新基因的探索和分離[A];中國生物化學與分子生物學會第八屆會員代表大會暨全國學術會議論文摘要集[C];2001年

9 唐靚;李林子;胡文敏;胡志航;張嶺;張麗婧;梅松;陳建國;劉冬英;劉臻;王茵;;吡咯喹啉醌對衰老大鼠學習記憶的影響及機制研究[A];第八屆全國中西醫(yī)結合營養(yǎng)學術會議論文資料匯編[C];2017年

10 李暉;汪德耀;;厚游仆蟲衰老細胞大核RNA合成的變化[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

相關重要報紙文章 前10條

1 楊艷;人體分子衰老也有“中年危機”[N];中國科學報;2019年

2 記者 張夢然;科學家力促延緩衰老藥物走向臨床[N];科技日報;2018年

3 本報記者 聶翠蓉;“年度科技突破”，你怎么看[N];科技日報;2016年

4 徐樹明　編譯;美科學家夢想清除衰老細胞[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

5 顧宸;剝離衰老細胞就可以長壽嗎[N];深圳特區(qū)報;2011年

6 ;延緩衰老 人類大有可為[N];中國醫(yī)藥報;2004年

7 王保成;延緩衰老的中成藥有哪些？[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

8 張?zhí)锟?清除衰老細胞的一箭多雕[N];中國醫(yī)藥報;2016年

9 記者 房琳琳;消除衰老細胞可延壽[N];科技日報;2016年

10 樂樂 編譯;科學能否讓青春永駐[N];光明日報;2012年

相關博士學位論文 前10條

1 王春麗;MeCP2/SIRT1對EPCs衰老調控的機制研究[D];上海交通大學;2018年

2 雷倩;臍帶間充質干細胞來源微泡逆轉間充質干細胞衰老及其機制研究[D];華中科技大學;2017年

3 賈敏;擬南芥ABS3亞家族MATE轉運蛋白與ATG8互作調控植物衰老的機制研究[D];西北農林科技大學;2019年

4 方佳;褪黑素介導內質網應激延緩犬脂肪間充質干細胞衰老作用的機制[D];西北農林科技大學;2018年

5 陳貴海;陰虛與動態(tài)衰老假說[D];山東中醫(yī)藥大學;2004年

6 肖向茜;p33ING1b在細胞衰老過程中的異常表達及其對DNA損傷修復和凋亡的影響[D];天津醫(yī)科大學;2004年

7 陳志宏;性腺軸系的衰老變化及天年飲延緩衰老的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2004年

8 汪瑪麗;肝與衰老相關性的理論及實驗研究[D];湖北中醫(yī)學院;2005年

9 李虹;AngⅡ-p22phox-活性氧通路介導血管衰老及siRNA靶向干預的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2006年

10 田輝;艾灸對實驗衰老大鼠肝細胞端粒調控相關因子及細胞周期的影響[D];湖北中醫(yī)學院;2007年

相關碩士學位論文 前10條

1 程霄;1、人參皂苷Rg1調控自噬延緩腦衰老的機制研究 2、當歸多糖拮抗D-半乳糖所致Nestin-GFP小鼠腦衰老作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

2 肖名賀;1.人骨髓造血細胞衰老的時間動態(tài)生物學研究 2.人參皂苷Rg1對D-gal致衰小鼠肝臟結構及功能的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

3 沈明香;EGF誘導人胚肺成纖維細胞衰老的機制研究[D];江蘇大學;2019年

4 張魯魯;間充質干細胞來源的外泌體通過抑制炎癥反應減緩衰老的機制研究[D];蘇州大學;2018年

5 孫亞楠;miR-34a通過靶向己糖激酶1影響細胞糖代謝參與調控間充質干細胞衰老的作用研究[D];吉林大學;2019年

6 楊孟愷;抗壞血酸調控骨髓間充質干細胞衰老的作用機制研究[D];上海交通大學;2018年

7 陽芳;衰老的PASMCs旁分泌IL-6促進肺高壓肺動脈平滑肌細胞增殖[D];南華大學;2019年

8 吳迪;Cdk5調控BAG3在衰老相關突觸功能紊亂的作用與機制探討[D];廈門大學;2018年

9 韓賢菁;一個氫離子探針抑制大鼠骨髓間充質干細胞衰老的機制研究[D];山東大學;2019年

10 莫日根;人間充質干細胞體外擴增培養(yǎng)過程中的衰老[D];內蒙古大學;2019年

，

本文編號：2675073