【摘要】：目的:研究PERK磷酸化在同型半胱氨酸致心肌損傷中的作用,闡明同型半胱氨酸致心肌損傷的可能機(jī)制。方法:以H9C2細(xì)胞為離體研究對(duì)象,用不同濃度4-PBA干預(yù)細(xì)胞(4-PBA濃度分別為:0mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L),探討4-PBA對(duì)細(xì)胞毒性作用,選擇最適濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)以不同濃度HCY干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞(HCY濃度分別為:50umol/L、100 umol/L、400 umol/L、1000 umol/L),檢測(cè)細(xì)胞活力,探討HCY對(duì)細(xì)胞毒性。而后根據(jù)4-PBA及HCY對(duì)細(xì)胞的半數(shù)抑制率選擇最適干預(yù)濃度完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。TUNEL凋亡染色檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡分?jǐn)?shù),免疫熒光法檢測(cè)ERO1α表達(dá)差異,Western Blot法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子表達(dá)。結(jié)果:(1)2mmol/L的4-PBA對(duì)H9C2心肌細(xì)胞無(wú)毒性作用,和對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.245,p=0.823);(2)HCY對(duì)H9C2心肌細(xì)胞具有損傷作用,其對(duì)細(xì)胞的損傷作用隨濃度增加而增大(F=2039.58,p0.001);(3)經(jīng)400ummol/L HCY干預(yù)的心肌細(xì)胞凋亡明顯增加(t=21.593,p0.001),經(jīng)4-PBA阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后凋亡分?jǐn)?shù)下降(t=8.742,p0.001);(4)經(jīng)HCY干預(yù)后的心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子PERK、p-PERK、CHOP、ERO1α表達(dá)增加,經(jīng)4-PBA阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后,以上因子表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:HCY對(duì)H9C2心肌細(xì)胞具有損傷作用,且呈濃度依賴性;HCY對(duì)心肌細(xì)胞損傷作用是通過(guò)促進(jìn)PERK磷酸化激活CHOP-ERO1α通路所介導(dǎo)的凋亡實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

圖 1 A 不同濃度 HCY 干預(yù)后 H9C2 細(xì)胞存活率：經(jīng)不同嘗試 HCY 干預(yù)后 H活率下降，呈濃度依賴性。B 不同濃度 4-PBA 干預(yù)后 H9C2 細(xì)胞存活率：2mmol/LPBA 對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯作用。

CHCY組與HCY+PBA干預(yù)后H9C2存活率比較：不同濃度HCY干預(yù)后細(xì)胞存活率下降，在同濃度HCY中加入PBA細(xì)胞存活率明顯改善
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R542.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2674405