發(fā)布時(shí)間：2020-05-21 09:29

【摘要】：目的:研究ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞脂噬的影響,為保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、AS性心血管疾病的預(yù)防與治療提供理論依據(jù)。方法:ox-LDL孵育內(nèi)皮細(xì)胞6 h、12 h、24 h、48 h。MTT法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞活性。油紅O染色的方法分析內(nèi)皮細(xì)胞的脂質(zhì)水平。Western blot法分析LC3-II/LC3-I,p62,LAMP1蛋白的表達(dá)。透射電鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞脂噬泡的形成,免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)觀察LC3與Bodipy共定位及LAMP1與Bodipy共定位情況。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示,和Control組比較,25μg/m L的ox-LDL作用6h、12 h、24 h、48 h,細(xì)胞活性未受影響;50μg/m L的ox-LDL作用48h能抑制細(xì)胞活性;100μg/m L的ox-LDL作用12 h、24 h、48 h能顯著抑制細(xì)胞活性,100μg/m L的ox-LDL對(duì)細(xì)胞活性影響最大。2.油紅O染色結(jié)果顯示,與Control組比較,ox-LDL作用ECs 6 h,脂滴明顯減少;ox-LDL作用ECs 24 h和48 h,脂滴蓄積明顯增加。3.透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),與Control組相比,ox-LDL作用6 h,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂噬泡(自噬泡內(nèi)包裹著脂滴)增多,ox-LDL作用24 h和48 h脂噬泡減少;并且ox-LDL作用48 h細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量的空泡。4.Western blot結(jié)果顯示,與Control組比較,ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞6 h,LC3-II/LC3-I及LAMP1蛋白表達(dá)增高,p62蛋白表達(dá)降低;ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞24 h,LAMP1蛋白表達(dá)降低,p62蛋白表達(dá)升高,并且ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞48 h,LC3-II/LC3-I,LAMP1蛋白表達(dá)降低,p62蛋白表達(dá)升高。5.免疫熒光共定位結(jié)果顯示,與Control組比較,ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞6h,Bodipy與LC3、Bodipy與LAMP1均發(fā)生大量共定位現(xiàn)象,ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞24 h和48 h,Bodipy與LC3、Bodipy與LAMP1均發(fā)生少量共定位現(xiàn)象。結(jié)論:ox-LDL作用內(nèi)皮細(xì)胞6 h,通過(guò)增強(qiáng)脂噬改善脂質(zhì)沉積;而ox-LDL作用內(nèi)皮細(xì)胞24 h和48 h則引起脂質(zhì)蓄積,可能與脂噬減弱有關(guān)。ox-LDL作用6 h誘導(dǎo)的內(nèi)皮脂噬增強(qiáng)可能與自噬/溶酶體通路對(duì)ox-LDL的降解作用增強(qiáng)有關(guān),ox-LDL作用24 h和48 h脂噬減弱與自噬/溶酶體通路對(duì)ox-LDL的降解作用減弱有關(guān)。
【圖文】：

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果.1 ox-LDL 抑制內(nèi)皮細(xì)胞的活性以不同濃度的 ox-LDL 處理 ECs 不同時(shí)間 (6 h、12 h、24 h、48 h)，，MT顯示，和 Control 組比較，濃度為 25 μg/mL 的 ox-LDL 作用 6 h、12 h、24 h 細(xì)胞活性未受影響；濃度為 50 μg/mL 的 ox-LDL 作用 48 小時(shí)能抑制細(xì)胞 (P < 0.05)； 濃度為 100 μg/mL 的 ox-LDL 作用 12 h、24 h、48 h 能顯著抑胞活性 (P < 0.05)，100 μg/mL 的 ox-LDL 對(duì)細(xì)胞活性影響最大 (見(jiàn)圖 3.1)。選擇 100 μg/mL 的 ox-LDL 作用內(nèi)皮細(xì)胞 6 h、12 h、24 h、48 h 進(jìn)行后續(xù)實(shí)

與 Control 組比較，ox-LDL 處理內(nèi)皮細(xì)胞 6 小時(shí)，自噬標(biāo)記蛋白LC3-II/LC3-I 增高 (P < 0.05)； ox-LDL 處理內(nèi)皮細(xì)胞 12 小時(shí)和 24 小時(shí)，LC3-II/LC3-I 無(wú)明顯變化；而 ox-LDL 處理內(nèi)皮細(xì)胞 48 小時(shí)，LC3-II/LC3-I 降低(P < 0.05)，自噬減弱；提示 ox-LDL 處理 6 小時(shí) ECs 自噬增強(qiáng)，隨著 ox-LDL 作用時(shí)間延長(zhǎng)，ox-LDL 對(duì) ECs 的損傷超過(guò)細(xì)胞的自我修復(fù)能力時(shí)，48 小時(shí)自噬減弱（見(jiàn)圖 3.2）。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

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1 龍石銀;黃良珠;喬新惠;張彩平;高細(xì)強(qiáng);佟麗;田英;;二苯乙烯苷對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2011年03期

2 朱冰坡,范利;動(dòng)脈粥樣硬化的抗氧化治療研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2005年04期

本文編號(hào)：2674068