發(fā)布時間：2019-04-02 16:06

【摘要】：目的:體外誘導人誘導性多能干細胞(induced pluripotent stem cell,iPS)分化為心臟起搏細胞,體內(nèi)解剖精確定位獲得兔竇房結組織,進而直接獲得心臟起搏細胞。方法:體外Cellapy法高效誘導人iPS細胞分化為心肌細胞和心臟起搏細胞,肉眼觀察心臟起搏細胞形態(tài)及起搏頻率,免疫熒光檢測人iPS源性心臟起搏細胞中特異性標志物HCN4陽性比例。體內(nèi)解剖精確定位獲得兔心臟起搏細胞后,應用qRT-PCR及免疫印跡法檢測兔心臟起搏細胞HCN4mRNA及蛋白表達水平。結果:運用Cellapy方法成功將人iPS細胞誘導分化為具有自發(fā)跳動特性的心臟起搏細胞,顯微攝像記錄顯示心臟起搏細胞搏動頻率為(70.60±2.71)次/min,且細胞形態(tài)以梭型為主;免疫熒光顯示人iPS源性心臟起搏細胞中HCN4蛋白陽性細胞占(9.42±1.57)%。同時,qRT-PCR及Western blot結果顯示兔竇房結組織中心臟起搏細胞HCN4表達明顯高于心房肌和心室肌(P0.01)。結論:體外Cellapy誘導法和動物體內(nèi)解剖精確定位是獲得心臟起搏細胞的兩種有效方法。這為研究病態(tài)竇房結綜合征的發(fā)病機制提供了可靠的細胞來源,同時為病態(tài)竇房結綜合征的治療提供了移植細胞。
[Abstract]:Aim: to induce human induced pluripotent stem cells (induced pluripotent stem cell,iPS) to differentiate into cardiac pacing cells in vitro. To obtain rabbit sinoatrial node tissue by anatomical localization in vivo, and then to obtain cardiac pacing cells directly. Methods: human iPS cells were induced to differentiate into cardiomyocytes and cardiac pacing cells by Cellapy method in vitro. The morphology and frequency of pacemaker cells were observed by naked eyes. The HCN4 positive ratio of specific markers in human iPS-derived cardiac pacing cells was detected by immunofluorescence. The expression of HCN4mRNA and protein in rabbit cardiac pacing cells were detected by qRT-PCR and Western blot after the rabbit cardiac pacing cells were accurately located in vivo. Results: human iPS cells were successfully induced to differentiate into pacemaker cells by Cellapy method. The pacemaker frequency of pacemaker cells was (70.60 鹵2.71) beats / min, and the morphology of pacemaker cells was spindle type. Immunofluorescence showed (9.42 鹵1.57)% of HCN4 protein positive cells in human iPS-derived cardiac pacing cells. At the same time, the results of qRT-PCR and Western blot showed that the expression of HCN4 in pacemaker cells of rabbit sinoatrial node was significantly higher than that of atrial muscle and ventricular muscle (P0.01). Conclusion: Cellapy induction in vitro and anatomical localization in vivo are two effective methods for obtaining cardiac pacing cells. This provides a reliable source of cells for the study of pathogenesis of sick sinus syndrome, and provides transplantation cells for the treatment of sick sinus syndrome.
【作者單位】： 云南省第一人民醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學基金項目(No:81260038,81360039) 云南省心律失常診治研究中心研究基金項目(No:2014NS260,2014NS259)
【分類號】：R541.7

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