背景及目的：細胞焦亡是近期發(fā)現(xiàn)的一種新的細胞死亡方式，其生物學特征是依賴于半胱天冬氨酸蛋白酶-1（Cysteine aspartate-specific protease-1, caspase-1）的死亡方式并伴隨著炎癥反應的發(fā)生。最近的研究發(fā)現(xiàn)介導細胞焦亡的重要功能分子caspase-1與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Caspase-1的重要功能之一是介導單核巨噬細胞等受到病原體感染或內(nèi)源性因素刺激后引起的細胞焦亡；同時，把白細胞介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）前體裂解成具有活性的IL-1β，而后者等能募集、激活其他免疫細胞，誘導其它炎癥因子、趨化因子、粘附分子等的合成，它們級聯(lián)放大了炎癥反應，促進動脈粥樣硬化的發(fā)展。自噬是真核細胞所共有的一種降解胞內(nèi)異常或過多的細胞器、蛋白等來維持細胞正常功能的機制。自噬可利用其雙層的膜結(jié)構(gòu)將要降解的細胞器或蛋白等進行包裹，形成自噬體，自噬體隨后與溶酶體融合，將這些底物進行降解。缺乏自噬會導致膽固醇晶體在斑塊中的聚集以及NACHT決定域，亮氨酸重復序列，pyrin決定域蛋白-3（NOD-,LRR-,and pyrin domain[PYD]-containingprotein3, NLRP3）炎癥小體的活化，從而加重了動脈粥樣硬化的發(fā)展進程�；钚匝醮兀╮eactive oxygen species, ROS）的產(chǎn)生與細胞焦亡關(guān)系密切，可以活化caspase-1，引起細胞焦亡。自噬在炎癥體及caspase-1的活化中發(fā)揮重要作用。他汀類藥物是羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶抑制劑，此類藥物表現(xiàn)出多效性，包括改善內(nèi)皮功能，促進斑塊的穩(wěn)定，減少氧化應激和炎癥，抑制血栓的形成。最近研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物可以提高某些組織細胞的自噬水平。但其對氧化的低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein, oxLDL）誘導的巨噬細胞自噬、細胞焦亡的影響以及產(chǎn)生影響的可能途徑及相關(guān)機制目前尚不清楚。本研究擬通過建立oxLDL誘導巨噬細胞脂質(zhì)聚集的模型，觀察脂質(zhì)聚集的巨噬細胞在辛伐他汀作用后細胞自噬及焦亡發(fā)生情況及可能的作用機制，探討他汀類藥物在oxLDL誘導巨噬細胞脂質(zhì)聚集過程中的作用，為尋找藥物作用新途徑及提供新的臨床治療思路提供實驗依據(jù)。方法：oxLDL作用于J774A.1小鼠巨噬細胞，采用油紅O染色法檢測細胞內(nèi)的脂質(zhì)聚集情況；細胞焦亡的檢測采用乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase, LDH）釋放試劑盒檢測LDH的釋放；熒光顯微鏡觀察丫啶橙（Acridine orange,AO）、溴化乙錠（Ethidium Bromide, EB)的染色情況；Western-blot檢測pro-caspase-1、cleaved caspase-1和IL-1β的表達情況；加入辛伐他汀藥物作用后，檢測上述實驗結(jié)果的變化情況；采用2’,7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽（2’,7’-dichlorofluorescindiacetate, DCFH-DA）染色流式細胞儀檢測辛伐他汀作用前后細胞內(nèi)ROS的水平；采用western-blot檢測辛伐他汀作用前后LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin-1的表達情況；激光共聚焦觀察LC3-GFP熒光聚集情況。結(jié)果：成功構(gòu)建了oxLDL誘導脂質(zhì)聚集的巨噬細胞的模型；油紅O染色結(jié)果表明，oxLDL作用于巨噬細胞后可導致脂質(zhì)聚集，，并呈明顯的劑量依賴；OxLDL作用于巨噬細胞后，LDH的釋放顯著增加由（18.04±3.57）%增加到（62.4±7.32）%；AO EB的復染中，橘紅色的熒光所占百分比顯著增加由（6±4）%增加到（65±3）%，提示細胞膜出現(xiàn)不完整的情況增多；Western-blot檢測caspase-1和IL-1β的表達呈增高的趨勢；加入辛伐他汀藥物作用后，油紅O染色結(jié)果表明脂質(zhì)聚集情況減少，總膽固醇檢測顯示細胞內(nèi)總膽固醇有減少的趨勢，細胞焦亡檢測結(jié)果：LDH釋放減少，AO EB染色結(jié)果顯示橘紅色的熒光有所占百分比減少趨勢，EB染色陽性（橘紅色）細胞減少至（35±7）%，western-blot檢測活化caspase-1和成熟IL-1β的表達明顯降低。細胞自噬檢測結(jié)果：Western-blot結(jié)果顯示細胞內(nèi)LC3Ⅱ/Ⅰ的表達與單一加入oxLDL作用的巨噬細胞相比增加明顯；激光共聚焦顯微鏡結(jié)果也表明辛伐他汀可顯著增加GFP-LC3熒光聚集體的形成。DCFH-DA染色流式細胞儀檢測結(jié)果：oxLDL誘導巨噬細胞產(chǎn)生大量的ROS，在辛伐他汀作用后，細胞內(nèi)ROS水平顯著降低至（139±0.97）%，應用3-MA自噬抑制劑，巨噬細胞內(nèi)的ROS恢復至較高水平，同時對辛伐他汀抑制的oxLDL誘導細胞焦亡水平也有進一步提高。結(jié)論：在oxLDL誘導的巨噬細胞脂質(zhì)聚集過程中，巨噬細胞發(fā)生caspase-1介導的細胞焦亡，伴隨炎癥細胞因子IL-1β的分泌；辛伐他汀可能通過增加巨噬細胞自噬、降低細胞內(nèi)ROS的水平，抑制oxLDL誘導的巨噬細胞焦亡。