本文選題：心肌成纖維細(xì)胞　切入點(diǎn)：慢病毒-基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-α綠色熒光蛋白載體　出處：《解剖學(xué)報(bào)》2017年01期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的探討慢病毒-基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α-綠色熒光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)對(duì)心肌成纖維細(xì)胞影響,最佳感染條件及目的蛋白表達(dá)和分泌特點(diǎn)。方法差速貼壁法分離培養(yǎng)乳大鼠心肌成纖維細(xì)胞,觀察和免疫熒光鑒定。不同滴度及條件的LV-SDF-1α-GFP轉(zhuǎn)染心肌成纖維細(xì)胞,觀察熒光表達(dá),探索最佳轉(zhuǎn)染條件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及陰性對(duì)照CON145病毒的轉(zhuǎn)染心肌成纖維細(xì)胞,繪制生長(zhǎng)曲線,探索轉(zhuǎn)染對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的增殖有無(wú)明顯影響。利用最佳轉(zhuǎn)染劑量組轉(zhuǎn)染心肌成纖維細(xì)胞,斑點(diǎn)印跡法(Dot blotting)檢測(cè)SDF-1α目的蛋白分泌。計(jì)量資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果心肌成纖維細(xì)胞具很高活性,傳至4代純度高,折光度好,無(wú)自發(fā)性搏動(dòng)。LV-SDF-1α-GFP最佳轉(zhuǎn)染感染復(fù)數(shù)(MOI)值為10,添加感染增強(qiáng)液,聚凝胺組感染效果最好,效率達(dá)80%。LV-SDF-1α-GFP組以及陰性對(duì)照CON145組對(duì)心肌成纖維細(xì)胞毒性作用小,細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化,與非轉(zhuǎn)染組生長(zhǎng)曲線相似,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)至第4天SDF-1α蛋白分泌量達(dá)最高值,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 LV-SDF-1α-GFP載體對(duì)心肌成纖維細(xì)胞具很高的轉(zhuǎn)染效率,細(xì)胞毒性小,并能夠分泌SDF-1α目的蛋白。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of lentivirus-stromal cell derived factor-1 偽 -green fluorescent protein (LV-SDF-1 偽 -GFPFP) on myocardial fibroblasts, the optimal infection conditions and the characteristics of protein expression and secretion. Observation and immunofluorescence identification. Myocardial fibroblasts were transfected with LV-SDF-1 偽 -GFP with different titers and conditions. The fluorescence expression was observed and the optimal transfection conditions were explored. The target gene virus of LV-SDF-1 偽 -GFP and the negative control CON145 virus were transfected into myocardial fibroblasts. The growth curve was drawn to explore whether transfection had a significant effect on the proliferation of myocardial fibroblasts. The best transfection dose group was used to transfect myocardial fibroblasts. Dot blotting was used to detect the secretion of SDF-1 偽 target protein. The quantitative data were analyzed statistically. Results Myocardial fibroblasts had high activity, high purity and good diopter. The optimal transfection number moi value of non-spontaneous pulsatile. LV-SDF-1 偽 -GFP was 10. The infection effect was the best in the polycoagulant group, the infection efficiency was 80. LV-SDF-1 偽 -GFP group and the negative CON145 group had little toxic effect on myocardial fibroblast, but the cell morphology had no obvious change. Similar to the growth curve of non-transfection group, the difference was not statistically significant (P 0.05). The expression of SDF-1 偽 protein in LV-SDF-1 偽 -GFP transfected myocardial fibroblasts reached the highest level on the 4th day. Conclusion the LV-SDF-1 偽 -GFP vector has high transfection efficiency, low cytotoxicity and secretion of SDF-1 偽 protein in myocardial fibroblasts.
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)用組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南省平頂山市第二人民醫(yī)院心內(nèi)科;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院感染科;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院科研項(xiàng)目培育基金(2013ZD121) 新鄉(xiāng)市重點(diǎn)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(ZG15015)
【分類(lèi)號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：1567362