本文關(guān)鍵詞：TK-1和TIMP-1基因共表達(dá)抑制大鼠球囊拉傷后頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的將介導(dǎo)人的TK-1和TIMP-1基因共表達(dá)重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染大鼠頸總動(dòng)脈球囊拉傷后血管內(nèi)膜增生模型,觀察并比較單基因(Ad-hTK-1或Ad-hTIMP-1)載體或雙基因共表達(dá)載體(Ad-hTK-1-hTIMP-1)對(duì)拉傷后血管內(nèi)膜增生的影響及可能機(jī)制。方法應(yīng)用經(jīng)典的球囊拉傷法,建立SD大鼠左頸總動(dòng)脈拉傷后血管內(nèi)膜增生動(dòng)物模型,取250-350g雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組:假手術(shù)組,單純拉傷組,對(duì)照病毒組,Ad-hTK-1組,Ad-hTIMP-1組,雙基因(Ad-hTK-1和Ad-hTIMP-1)組。除假手術(shù)組外,其余各組用2F球囊導(dǎo)管從頸外動(dòng)脈進(jìn)入頸總動(dòng)脈并拉傷,分別在各組大鼠拉傷頸動(dòng)脈處注射生理鹽水(30μl)、對(duì)照病毒、Ad-hTK-1、Ad-hTIMP-1或雙基因病毒(1×109pfu/只,在30μl病毒保存液里)。局部干預(yù)14天后處死大鼠,組織學(xué)檢測(cè)內(nèi)膜增生情況(計(jì)算內(nèi)膜/中膜面積比),共聚焦免疫熒光檢測(cè)hTK-1、hTIMP-1基因的表達(dá),蛋白免疫印跡法檢測(cè)hTK-1、hTIMP-1、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)水平,免疫組化檢測(cè)PCNA表達(dá)水平。結(jié)果1.成功建立球囊拉傷大鼠頸總動(dòng)脈的血管內(nèi)膜增生動(dòng)物模型(第一部分),球囊拉傷后7、14、28 d內(nèi)膜面積(IA)和內(nèi)膜/中膜面積比值(I/M)逐漸增大(趨勢(shì)檢驗(yàn)P0.01);各實(shí)驗(yàn)組IA、I/M呈時(shí)間依賴性(7-28 d)增加(P0.01)。2.與假手術(shù)組相比,單純拉傷頸總動(dòng)脈或?qū)φ詹《窘M大鼠的內(nèi)膜面積(IA)和內(nèi)膜/中膜面積比值(I/M)明顯增加(P均0.01)。單純拉傷組和對(duì)照病毒組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照病毒干預(yù)大鼠相比,Ad-hTK-1或Ad-hTIMP-1或雙基因局部干預(yù)14d后,均可明顯減少拉傷后大鼠頸總動(dòng)脈IA(0.110±0.015比0.160±0.010;0.121±0.016比0.160±0.010;0.081±0.008比0.160±0.010;P均0.01)和I/M比值(1.443±0.097比2.035±0.117;1.522±0.078比2.035±0.117;0.972±0.072比2.035±0.117;均P0.01),明顯抑制新生內(nèi)膜增厚,抑制率分別為29.1%,25.2%和52.2%。與Ad-hTK-1或Ad-hTIMP-1單基因比較,雙基因聯(lián)合共表達(dá)可進(jìn)一步降低IA和I/M比值(P均0.01),減輕內(nèi)膜增生。3.球囊拉傷后頸動(dòng)脈損傷部位的PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平明顯高于假手術(shù)組(均P0.01)。單純拉傷組與對(duì)照病毒組相比,PCNA、MMP-2和MMP-9水平均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。Ad-hTK-1或Ad-hTIMP-1或雙基因干預(yù)后,均能顯著下調(diào)PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平(均P0.01)。與Ad-hTK-1或Ad-hTIMP-1單基因比較,雙基因聯(lián)合共表達(dá)可進(jìn)一步降低PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平(均P0.01)。結(jié)論1.成功構(gòu)建大鼠頸總動(dòng)脈球囊拉傷后血管內(nèi)膜增生模型,局部應(yīng)用攜帶的目的基因TK-1和(或)TIMP-1的重組腺病毒載體,可將目的基因成功轉(zhuǎn)入頸總動(dòng)脈,并獲得有效表達(dá)。2.TK-1或TIMP-1單基因過(guò)表達(dá)均可抑制球囊拉傷后內(nèi)膜增生,與單基因(TK-1或TIMP-1)表達(dá)載體相比,同一載體介導(dǎo)的雙基因(TK-1和TIMP-1)聯(lián)合共表達(dá)抑制球囊拉傷后的大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生具有疊加效應(yīng),可能的機(jī)制與下調(diào)PCNA、MMP-2和MMP-9的表達(dá)有關(guān)。3.雙基因共表達(dá)抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生效果優(yōu)于單基因,為多基因治療在臨床前期治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 杜利;VEGF164與EGFP雙基因共表達(dá)的優(yōu)化新型HIV-1慢病毒載體治療大鼠急性腦缺血[D];吉林大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1247528