本文關(guān)鍵詞：肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)BRCC36在介導(dǎo)cGMP抑制TGF-β信號(hào)中的作用

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【摘要】：目的：本研究旨在探討B(tài)RCC36蛋白在介導(dǎo)cGMP抑制TGF-β信號(hào)中的作用,及其可能作用機(jī)制。方法：(1)：采用組織塊貼壁法,進(jìn)行肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)原代培養(yǎng),本實(shí)驗(yàn)采用第三代細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,并采用大鼠平滑肌細(xì)胞特異性表達(dá)分子α-SMA,經(jīng)免疫熒光染色技術(shù),對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行純度鑒定。(2)：給予PASMCs cGMP (0.5mM)預(yù)處理1小時(shí),而后再給予TGF-p 1 (2ng/ml)刺激12小時(shí),提取細(xì)胞總RNA,以GAPDH為內(nèi)參,采用RT-PCR的方法檢測(cè)TGF-β1刺激標(biāo)志物PAI-1的mRNA的表達(dá)情況。(3)：給予PASMCs, TGF-β1 (2ng/ml)刺激,選擇12小時(shí)為時(shí)間點(diǎn),提取細(xì)胞總蛋白,并采用Western blot的方法,以a-tubulin為內(nèi)參,檢測(cè)BRCC36蛋白的表達(dá)情況。(4)：分別給予給予PASMCs轉(zhuǎn)染空載體腺病毒(AD-NULL)和攜帶BRCC36過(guò)表達(dá)基因的腺病毒(AD-BRCC36)后,再給予cGMP (0.5mM)預(yù)處理1小時(shí),接著給予TGF-β1 (2ng/ml)處理12小時(shí),提取總RNA,檢測(cè)PAI-1的mRNA的表達(dá)情況。(5)：給予PASMCs轉(zhuǎn)染AD-BRCC36后,先后給予微管解聚劑諾考達(dá)唑(5 ug/ml), cGMP (0.5mM)各處理1小時(shí)后,給予TGF-β1 (2ng/ml)刺激12小時(shí),提取總RNA,采用RT-PCR的方法,檢測(cè)PAI-1的mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果：(1)所培養(yǎng)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,形狀為梭形,并成放射性生長(zhǎng),狀態(tài)良好,純度達(dá)到95%以上,基本符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。(2)采用cGMP預(yù)處理的方法激活A(yù)NP-cGMP-PKG信號(hào)通路,可以明顯抑制TGF-β1誘導(dǎo)的PAI-1的表達(dá),并且能夠降低PAI-1的基礎(chǔ)表達(dá)。(3)在給予TGF-β1刺激后,PASMCs內(nèi),較空白對(duì)照組,內(nèi)源性BRCC36表達(dá)增加。(4)在轉(zhuǎn)染AD-BRCC36的PASMCs,相較轉(zhuǎn)染AD-NULL, cGMP對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的PAI-1表達(dá)的抑制作用增強(qiáng),并且過(guò)表達(dá)BRCC36能夠減少細(xì)胞內(nèi)PAI-1的基礎(chǔ)表達(dá)。(5)微管解聚劑諾考達(dá)唑處理后,能夠去除,過(guò)表達(dá)BRCC36增強(qiáng)cGMP抑制TGF-β1信號(hào)通路的作用。結(jié)論：去泛素化酶BRCC36能夠增強(qiáng)cGMP對(duì)TGF-β的抑制作用,并且依賴于β2-tubulin的結(jié)構(gòu)完整性。其可能機(jī)制是BRCC36對(duì)Smad蛋白在泛素化水平進(jìn)行了調(diào)控,并促進(jìn)其與β2-tubulin結(jié)合增加,從而阻止其入核。
【關(guān)鍵詞】：BRCC36 心房利鈉肽 去泛素化 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 肺動(dòng)脈高壓
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 英文縮寫(xiě)詞7-8
• 第一章：前言8-11
• 第二章：材料與方法11-19
• 第三章：實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-26
• 第四章：討論26-32
• 第五章：結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述36-42
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 致謝42-43
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄43-44

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 徐歐繁;肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)BRCC36在介導(dǎo)cGMP抑制TGF-β信號(hào)中的作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1041840