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MicroRNAs下調(diào)LXRs的分子機(jī)制及其對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)生成的抑制作用研究

發(fā)布時(shí)間:2024-04-13 00:09
  非酒精性脂肪性肝。╪on-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是肝功能異常最常見(jiàn)的一種誘因,以甘油三酯(Triglyceride,TG)在肝細(xì)胞中的堆積為特征。脂代謝的穩(wěn)態(tài)由一系列轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控,包括核受體中的肝X受體(liver X receptors,LXRs)。LXRα (NR1H3)和LXRβ (NR1H2)是LXRs的兩種亞型,它們通過(guò)激活脂代謝相關(guān)基因而啟動(dòng)肝臟脂質(zhì)生成,這些靶基因包括固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c (sterol-regulatory element binding protein1c,SREBP-1c)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,F(xiàn)AS)、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(carbohydrate responsive element-binding protein,ChREBP)和乙酰CoA羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)。因此抑制LXRs的表達(dá)和活性就有可能保護(hù)肝臟免受脂肪堆積所造成的損傷。MicroRNAs (miRs)是非編碼小RNA(20-22個(gè)核苷酸),能結(jié)合...

【文章頁(yè)數(shù)】:105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

圖1-1M-MLV(Invitrogen)逆轉(zhuǎn)錄使用說(shuō)明

圖1-1M-MLV(Invitrogen)逆轉(zhuǎn)錄使用說(shuō)明

圖1-1M-MLV(Invitrogen)逆轉(zhuǎn)錄使用說(shuō)明即進(jìn)行下一步的PCR反應(yīng)或凍存。PCR檢測(cè)miR-1/206/613對(duì)LXRα表達(dá)的影響如下:(產(chǎn)物137bp):'-gtgaaggtgacagcagycggtt-3''-gaagtggggtggct....


圖1-22-ΔΔCt計(jì)算法示例

圖1-22-ΔΔCt計(jì)算法示例

第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文下游引物(10μM)ddH2O1μl17.7μleal-timePCR反應(yīng)條件如下95℃×1cycle95℃60℃30sec30sec30sec}×40cycles果分析采用Bio-RadIQ5軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析采用2-ΔΔCt....


圖1-4SDS-PAGE濃縮膠配置方法

圖1-4SDS-PAGE濃縮膠配置方法

圖1-4SDS-PAGE濃縮膠配置方法2).蛋白樣品準(zhǔn)備:各取40μg蛋白,加入5×蛋白上樣Buffer,100℃或沸水浴加熱5min。3).上樣后,保持電壓80V,待蛋白進(jìn)入分離膠后,將電壓調(diào)至120V,根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計(jì)目的蛋白....


圖1-5生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-1/206/613在LXRα3

圖1-5生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-1/206/613在LXRα3'-UTR區(qū)的結(jié)合位點(diǎn)

4).洗滌:加入Western洗滌液,在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌10-15min。棄洗滌液后,再加入洗滌液,洗滌10-15min。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。5).二抗孵育:參照二抗說(shuō)明書(shū),按照適當(dāng)比例用封閉液稀釋辣根過(guò)氧化物....



本文編號(hào):3952180

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