目的:非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是與胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)密切相關(guān)的肝損傷性疾病,已成為目前全球最常見(jiàn)的慢性肝病,也是世界公共健康問(wèn)題之一。研究表明,改善胰島素抵抗可有效緩解NAFLD。AWRK6是實(shí)驗(yàn)室從東北林蛙皮膚分泌物中鑒定并改造的18個(gè)氨基酸的陽(yáng)離子多肽,具有提高機(jī)體的胰島素敏感性,緩解胰島素抵抗,改善小鼠2型糖尿病等多種功能。本研究擬對(duì)AWRK6改善NAFLD的作用進(jìn)行分析,并進(jìn)一步對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探究,為NAFLD的治療提供新策略。方法:利用油酸(OA)誘導(dǎo)HepG2肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)積累,構(gòu)建具有NAFLD病征的體外細(xì)胞模型。使用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,分析細(xì)胞內(nèi)TG含量變化,優(yōu)化確定AWRK6最佳作用條件(5×10-8 mol/L,4 h),并以5×10-8mol/L AWRK6干預(yù)油酸誘導(dǎo)模型細(xì)胞4 h,檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG含量,在細(xì)胞水平評(píng)估AWRK6改善NAFLD的作用。同時(shí)利用高脂飼料飼養(yǎng)小鼠12周,構(gòu)建NAFLD小鼠模型,建模成功后將小鼠隨機(jī)分為NC組(普通...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 概述
    1.2 NAFLD治療藥物研究現(xiàn)狀
        1.2.1 非肽類藥物
        1.2.2 肽類藥物
    1.3 NAFLD致病機(jī)制
        1.3.1 NAFLD致病機(jī)制相關(guān)學(xué)說(shuō)
        1.3.2 NAFLD相關(guān)信號(hào)通路
    1.4 NAFLD臨床前模型構(gòu)建
    1.5 研究目的及意義
第2章 脂質(zhì)積累細(xì)胞模型建立及AWRK6作用條件優(yōu)化
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 脂質(zhì)積累細(xì)胞模型的建立
        2.3.3 AWRK6處理最佳條件的篩選
        2.3.4 AWRK6 對(duì)脂質(zhì)積累細(xì)胞內(nèi)TG含量的影響
        2.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 脂質(zhì)積累細(xì)胞模型建立
        2.4.2 AWRK6作用濃度及時(shí)間的確定
        2.4.3 Exendin-4 作用濃度的確定
        2.4.4 AWRK6 對(duì)細(xì)胞內(nèi)TG含量影響
    2.5 討論
第3章 AWRK6改善小鼠非酒精性脂肪肝
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 NAFLD小鼠模型建立
        3.3.2 分組及給藥
        3.3.3 空腹血糖測(cè)定
        3.3.4 生理生化指標(biāo)測(cè)定
        3.3.5 小鼠肝臟處理、HE染色和油紅O染色
        3.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 NAFLD小鼠模型建立
        3.4.2 AWRK6 降低NAFLD小鼠體重
        3.4.3 AWRK6影響肝臟形態(tài)、降低肝臟重量和系數(shù)
        3.4.4 AWRK6 改善NAFLD小鼠的胰島素抵抗
        3.4.5 AWRK6 改善NAFLD小鼠血清生化指標(biāo)
        3.4.6 AWRK6 抑制NAFLD小鼠肝臟病變和脂質(zhì)積累
    3.5 討論
第4章 AWRK6 通過(guò)AMPK/ACC信號(hào)通路改善NAFLD
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 細(xì)胞處理及給藥
        4.3.2 細(xì)胞蛋白提取
        4.3.3 組織蛋白提取
        4.3.4 Western blot
        4.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 AWRK6對(duì)Hep G2 細(xì)胞內(nèi)蛋白的影響
        4.4.2 AWRK6對(duì)小鼠肝臟中蛋白的影響
    4.5 討論
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況



本文編號(hào)：3786517