本文關鍵詞：間充質干細胞移植抑制肝星狀細胞治療肝纖維化的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內結締組織異常增生,導致肝內彌漫性細胞外基質過度沉積的病理過程。許多慢性肝臟疾病最終均發(fā)展為肝纖維化及肝硬化。在肝纖維化進程中,肝星狀細胞的活化是關鍵事件。膠原纖維等細胞外基質多是由肝星狀細胞活化而成的肌成纖維細胞產生的。一般認為肝星狀細胞有四種狀態(tài):原始靜止的肝星狀細胞、激活的肝星狀細胞、靜止的肌成纖維細胞、衰老凋亡的肝星狀細胞。有學者提出抗肝纖維化的主要策略包括誘導肌成纖維細胞凋亡、維持細胞靜止表型或抑制細胞活化等。但迄今為止,臨床上尚無確切有效的抑制肝星狀細胞的抗纖維化藥物,肝纖維化仍缺乏有效治療手段。間充質干細胞(Mesenchymal stem cell,MSC)是來源于中胚層的一類成體多能干細胞,除具有自我增殖和多向分化等干細胞特性外還具有免疫調節(jié)、靶向歸巢、靶向抗炎、主動適應并改造微環(huán)境等生物學特性,使MSC適用于多種組織修復治療。研究表明MSC對缺血性心肌梗死引起的心臟纖維化、自身免疫性疾病引起的腎臟纖維化及特發(fā)性肺間質纖維化均有療效。最近,Kharaziha P等利用MSC治療肝硬化I-II期臨床研究和Salama H等利用MSC治療終末期丙肝肝病研究中發(fā)現MSC在抗肝纖維化方面有一定療效,提示MSC移植在治療肝纖維化方面具有廣闊的應用前景。但由于多個臨床中心的研究結果并不一致,治療機制尚未明確,均有待于進一步的基礎與臨床研究。研究目的:研究MSC移植對肝纖維化和HSC活化的影響及其可能機制。研究方法:Ficoll-Hypaque梯度密度離心法及細胞貼壁培養(yǎng)法分離純化骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC)。取18只SD大鼠,通過腹腔小劑量注射CCl4 8周,進行肝纖維化造模,在造模4周時,取其中9只作為治療組,每周經尾靜脈移植給予該組每只大鼠6×106個MSC,持續(xù)4周;另外9只作為模型對照組,經尾靜脈移植給予不含MSC的等量生理鹽水,持續(xù)4周;另取9只大鼠,作為正常對照組,僅給予尾靜脈等量生理鹽水注射,持續(xù)4周。自實驗開始,每周用全自動生化分析儀測定血清ALT、AST、TBIL、ALB水平,至結束共測定8次。實驗終點8周時通過免疫組化方法對α平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、轉化生長因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型膠原蛋白(CollagenⅠ,COLⅠ)在肝組織中的定位和表達進行研究;原位灌注和梯度密度離心法分離HSC,326nm紫外光激發(fā)和α-SMA免疫熒光染色法鑒定HSC;q RT-PCR和Western Blot檢測HSC中α-SMA、TGF-β1、COLⅠ、解偶聯蛋白2(Uncoupling protein 2,UCP2)、解偶聯蛋白3(Uncoupling protein 3,UCP3)基因和蛋白的表達水平。研究結果:1、與模型組相比,治療組經MSC移植治療后,血清ALT、AST、TBIL水平逐漸呈下降趨勢,經統計學分析有顯著差異;2、治療組肝組織纖維化和炎癥細胞浸潤程度較模型組明顯改善、肝組織α-SMA、TGF-β1和COLⅠ表達水平較模型組明顯減低,經統計學分析有顯著差異;3、與模型組相比,治療組HSC中α-SMA、TGF-β1、COLⅠ基因和蛋白表達水平下降,UCP2、UCP3基因和蛋白的表達水平升高,經統計學分析有顯著差異。結論:1、CCl4長期小劑量腹腔注射能誘導典型的肝纖維化模型,造模過程中以BM-MSC尾靜脈注射進行干預治療,可以減輕肝臟炎癥,抑制肝纖維化形成,促進肝功能恢復;2、BM-MSC抗肝纖維化的療效可能與MSC的抗炎作用及抑制HSC活化相關;BM-MSC可通過上調HSC中UCP2表達而抑制其活化;3、BM-MSC移植可用于治療肝纖維化。
【關鍵詞】：骨髓間充質干細胞 肝纖維化 肝星狀細胞 a平滑肌肌動蛋白 轉化生長因子β1 Ⅰ型膠原 解偶聯蛋白2
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2
【目錄】：

• 英文縮略詞5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-35
• 結果35-41
• 討論41-44
• 結論44-45
• 參考文獻45-48
• 綜述48-71
• 參考文獻59-71
• 在校期間論文情況71-72
• 致謝72

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