丙型肝炎病毒（HCV）是丙型肝炎病的主要病原體。據(jù)1999年世界衛(wèi)生組對于HCV感染情況的調(diào)查,全球感染HCV的患者約1.7-2.0億,我國屬于HCV的高度感染區(qū),其感染者約占3.2%。高效病毒體外培養(yǎng)體系與合適實驗動物模型的缺乏,是丙型肝炎藥物與疫苗研究的主要障礙。2005年,高效的HCV病毒細胞培養(yǎng)體系的建立,可以經(jīng)過體外培養(yǎng)獲得高感染性的HCV病毒,使得動物模型的建立尤為緊迫。除丙型肝炎病毒的自然宿主——人和黑猩猩外,尚未發(fā)現(xiàn)其他自然動物對HCV易感。樹鼩是一種主要分布于我國云南地區(qū)低等靈長類動物。研究發(fā)現(xiàn),樹鼩可被HCV患者的血清感染,但是由于HCV患者血清的來源不明、病毒滴度較低、感染不穩(wěn)定、樹鼩個體背景復(fù)雜等原因,丙型肝炎病毒對樹鼩的感染特性未被最終闡明。本研究以人工馴化、繁育的樹鼩為實驗對象,采用二步灌流、膠原酶消化法,分離、獲得樹鼩原代肝細胞（PTH）,優(yōu)化灌流液、離心速度和培養(yǎng)基,用單因素比較和正交實驗法進行比較各優(yōu)化因素之間的差別,最終以臺盼藍染色法測定獲得PTH細胞數(shù)量,用MTT法測定PTH的狀態(tài)。實驗確定的最佳灌流液為D-Hank’s、最佳離心速度為800rpm... 

【文章來源】：昆明理工大學云南省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
插圖與附表清單
英文縮寫詞表
第一章 緒論
    1.1 丙型肝炎與丙型肝炎病毒
        1.1.1 HCV生物學特性與致病機制
        1.1.2 丙型肝炎的診斷和治療
    1.2 丙型肝炎動物模型
        1.2.1 黑猩猩
        1.2.2 小鼠
        1.2.3 樹鼩作為HCV的小動物模型的研究進展
    1.3 丙型肝炎體外培養(yǎng)技術(shù)
        1.3.1 HCV亞基因組復(fù)制子培養(yǎng)體系
        1.3.2 HCV細胞培養(yǎng)體系
        1.3.3 細胞系
        1.3.4 原代細胞
    1.4 丙型肝炎入胞機制與受體
        1.4.1 四個受體及功能機制
        1.4.2 CD81轉(zhuǎn)染增強感染作用及病毒適應(yīng)性變異
    1.5 實驗技術(shù)路線圖
第二章 樹鼩原代肝細胞的分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.4 實驗方法的條件優(yōu)化
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 優(yōu)化灌流液和離心速度前后樹鼩原代肝細胞狀態(tài)比較
        2.3.2 優(yōu)化方法前后樹鼩原代肝細胞得量、成活率比較
        2.3.3 優(yōu)化方法后樹鼩原代肝細胞生長曲線
        2.3.4 優(yōu)化方法前后樹鼩原代肝細胞存活時間比較
    2.4 討論
        2.4.1 優(yōu)化方法對樹鼩原代肝細胞的分離獲得影響
        2.4.2 優(yōu)化方法前后樹鼩原代肝細胞生長情況的差異
        2.4.3 分析優(yōu)化方法后樹鼩原代肝細胞生長曲線與形態(tài)觀察
    2.5 本章小結(jié)
第三章 人CD81受體轉(zhuǎn)染樹鼩原代肝細胞
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗試劑（試劑盒）
        3.2.4 實驗方法
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 CD81轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài),判斷轉(zhuǎn)染試劑對細胞的影響
        3.3.2 CD81轉(zhuǎn)染樹鼩原代肝細胞PCR檢測結(jié)果
        3.3.3 CD81轉(zhuǎn)染樹鼩原代肝細胞定量PCR檢測結(jié)果
    3.4 討論
        3.4.1 CD81轉(zhuǎn)染樹鼩原代肝細胞定性檢測結(jié)果分析
        3.4.2 CD81轉(zhuǎn)染樹鼩原代肝細胞相對定量結(jié)果分析
    3.5 本章小結(jié)
第四章 受體介導(dǎo)HCV感染樹鼩原代肝細胞的感染性的變化與分析
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗試劑（試劑盒）
        4.2.4 PCR引物
        4.2.5 實驗方法
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 轉(zhuǎn)染表達了CD81受體的PTH感染HCV后的上清定量PCR結(jié)果
        .4.3.2 比較感染過程中轉(zhuǎn)染的PTH和未轉(zhuǎn)染的上清載量差異。
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄附錄
附錄B 其他需要說明的內(nèi)容


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3084096