發(fā)布時間：2021-03-11 15:28

　　目的通過免疫組化和Western blot等方法,觀察由乙肝病毒X蛋白（HBX）引起的HepG2細胞內Wnt誘導的分泌型蛋白1（以下簡稱為WISP-1）的變化,探索乙肝病毒導致肝癌的新的機制。方法（1）分別收集肝癌,癌旁,及正常肝組織標本。采用免疫組化的方法檢測WISP-1在這些組織內的表達及差異。（2）采用脂質體Lipofectamine2000為媒介,分別將pc-DNA3.1（+）和pc-DNA3.1（+）-HBX兩種質粒轉染HepG2細胞,經過G418長期篩選,得到穩(wěn)定轉染的細胞株G0和Gx。（3）采用PCR技術檢測G0和Gx中WISP-1mRNA的表達水平及差異。（4）采用Western blot從蛋白水平檢測G0和Gx中WISP-1的表達水平及差異。結果（1）免疫組化結果顯示,肝癌組織中WISP-1的陽性表達率高于癌旁組織及正常肝組織,結果經X2檢驗差異有統計學意義。提示WISP-1在肝癌組織中高表達。（2）經過G418穩(wěn)定篩選一月后,成功建立能夠穩(wěn)定分泌HBX蛋白的Gx細胞系及相應的空轉細胞系G0。（3）Western blot鑒定Gx和G0轉染成功。且Gx細胞能夠表達HB... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同組織中WISP-1蛋白的表達（SP,×400）

Westernblot鑒定Gx與G0細胞內HBX的表達b-actin

PCR反應檢測Gx和G0細胞中WISP-1mRNA的表達M:DNAMarker;G:GAPDH;W:WISP-1;

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3076678