目地:microRNA是一類含22-28個核苷酸的非編碼小分子RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平調(diào)控基因的表達過程,參與了許多生理病理過程的調(diào)節(jié)。肝卵圓細胞(Hepatic ovalcell,HOC)是肝臟的原始兼性多能干細胞,主要分布于肝臟小葉間膽管或Hering管,即終末膽管區(qū)域。肝卵圓細胞具備極強的體外自我復(fù)制、克隆增殖及分化能力,在肝臟嚴重損傷或者成熟肝細胞增殖受到抑制的時候,肝再生則主要通過卵圓細胞的增殖與分化來完成。本研究的目的是探討miR-21在肝卵圓細胞增殖過程中的作用及機制。方法:用慢病毒分別轉(zhuǎn)染大鼠肝卵圓細胞使miR-21的表達增強和抑制,用熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效率和PCR檢測三組miR-21表達情況(空載體組,miR-21增強組,miR-21抑制組),提取轉(zhuǎn)染后的肝卵圓細胞中的蛋白,用Western blotting方法檢測三組Smad7蛋白的表達情況,PCR檢測三組Smad7 mRNA的表達情況。用cck-8方法檢測轉(zhuǎn)染后三組肝卵圓細胞的增殖情況。結(jié)果:慢病毒轉(zhuǎn)染肝卵圓細胞后篩選出了穩(wěn)定的細胞株,PCR結(jié)果示miR-21增強組其miR-21表達增強,miR-21抑制組其miR-21表達抑制。Western blotting顯示miR-21增強組其Smad7蛋白的表達減少,miR-21抑制組其Smad7蛋白的表達增強。PCR結(jié)果示Smad7mRNA的趨勢和miR-21表達趨勢相一致。結(jié)論:過表達miR-21通過Smad7促進肝卵圓細胞增殖過程。
【學位單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R575
【部分圖文】：

圖２?：?ｃｏｎｔｒｏｌ：空載體慢病毒轉(zhuǎn)染的ＨＯＣ?ｐｒｅ－ｍｉＲ－２１?：?ｍｉＲ－２１增強載體??ａｎｔｉ－ｍｉＲ－２１：?ｍｉＲ－２１－抑制慢病毒載體

?３．３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測三組Ｓｍａｄ７蛋白的表達??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ觀察到，如圖３所示，相對于空載體對照細胞，ｍｉＲ－２１增強??慢病毒轉(zhuǎn)染的細胞組其Ｓｍａｄ７蛋白的表達減少，ｍｉＲ－２１抑制慢病毒轉(zhuǎn)染的細胞組??其Ｓｍａｄ７蛋白的表達增強。３Ａ：?Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ顯示三組Ｓｍａｄ７蛋白顯影情況。３Ｂ：??三組Ｓｍａｄ７蛋白表達柱狀圖。??老ｓ?！??ｉ?／?Ｉ??Ａ?■??Ｓｍａｄ７??ＧＡＰＤＨ??Ｂ?，??）Ｗｌ??ｚ?／?／??／?／?／??圖３：?ｓｃｒａｍｂｌｅ：空載體慢病毒轉(zhuǎn)染的ＨＯＣ?ｐｒｅ－ｍｉＲ－２１：?ｍｉＲ－２１增強慢病毒轉(zhuǎn)染??的?ＨＯＣ?ａｎｔｉ－ｍｉＲ－２１：?ｍｉＲ－２１－抑制慢病毒轉(zhuǎn)染的?ＨＯＣ。（＊：尸＜０．０５）??３．４?ＰＣＲ檢測Ｓｍａｄ７?ｍＲＮＡ的表達??采用２－ＡＡＣＴ法計算出不同組中Ｓｍａｄ７ｍＲＮＡ的相對表達量，如圖４Ａ所示：??ｐｒｅ－ｍｉＲ－２１?組其?Ｓｍａｄ７?ｍＲＮＡ?的表達增強，ａｎｔｉ－ｍｉＲ－２１?組其?Ｓｍａｄ７?ｍＲＮＡ?的表達??降低（與ｍｉＲ－２１的表達圖趨勢一致）。??１９??

３．５?ＣＣＫ－８檢測三組細胞在不同時間點的表迗??三組細胞在２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ，?９６ｈ培養(yǎng)后用ＣＣＫ－８試劑檢測４５０ｎｍ的吸收波，結(jié)??果如圖４Ｂ表明ｍｉＲ－２１增強組細胞增殖數(shù)量多于ｍｉＲ－２１抑制組的細胞數(shù)量，說明??ｍｉＲ－２１過表達可以增強肝卵圓細胞的增殖。??２０??
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本文編號：2851118