【摘要】： 一、背景和目的 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)人慢性肝病組織如肝硬化、亞大塊肝壞死后肝再生、兒童先天性肝外膽道閉鎖、遺傳性血色病、慢性病毒性肝炎、原發(fā)性肝癌中都存在類似于卵圓細胞的肝前體細胞。這種肝前體細胞定位于匯管區(qū)、纖維間隔、匯管區(qū)旁肝實質(zhì)、假小葉及炎癥邊界。研究發(fā)現(xiàn)卵圓細胞存在于肝硬化,肝癌等各種慢性肝病的肝臟組織中,肝臟卵圓細胞在慢性肝炎肝臟組織中陽性表達。隨著肝臟卵圓細胞特異性標記物的發(fā)現(xiàn),卵圓細胞相關研究成為熱點,特別是肝臟卵圓細胞雙重分化特性及參加肝臟損傷后的修復的相關研究,更為研究者探究肝臟損傷的保護、治療及肝纖維化的形成機制提供了最新途徑。 在肝膽外科臨床中,膽道梗阻、膽汁淤積是常見的病理環(huán)境,較長時間梗阻,可誘發(fā)永久性肝損害,甚至發(fā)展成肝纖維化及肝硬化,是臨床治療的難題,相關發(fā)病機制基礎研究有現(xiàn)實意義。目前肝臟卵圓細胞與外科急性膽道梗阻后肝組織損傷及修復的相關研究,國內(nèi)外鮮見報道。另外,膽道梗阻模型可以結扎嚙齒類動物的膽總管獲得,大鼠的膽總管結扎模型已有了評估和描述,為研究提供了可靠的動物模型。 本研究通過結扎Wistar大鼠膽總管動物模型,復制急性膽道梗阻病理狀態(tài),評估膽總管結扎模型的可行性并總結模型建立經(jīng)驗；通過組織學技術,探究肝臟卵圓細胞與急性膽道梗阻后肝臟病理改變的相關性。 二、材料與方法 雄性Wistar大鼠90只。體重250-300克,將動物隨機分成實驗組和對照組。每組每個時間點通過膽總管接扎,造模成功8只。術后觀察所有動物的體重、活動及黃疸情況。術后第1、2、3、5、7天,每組各處死8只,取血行總膽紅素(TBIL)、直膽紅素(DBIL)、谷丙轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)檢查。取肝右葉應用4%多聚甲醛固定,行肝臟組織學分析。 1、通過觀察不同時間點實驗動物的體重、黃疸及活動變化情況,采集不同時間點血液標本,進行酶學檢測,總結模型死亡率和成功率。 2、繪制不同時間點實驗動物體重、酶學指標變化曲線,總結其與病情、病程之間的相關性。 3、通過肉眼及HE染色觀察急性膽道梗阻不同時間點肝臟形態(tài)改變。 4、通過膠原特殊染色,觀察肝臟膠原增生情況。 5、通過免疫組化,OV-6標記卵圓細胞,觀察不同時間點卵圓細胞的數(shù)目、分布,探究其與急性膽道梗阻的關系及變化規(guī)律。 三、結果 預實驗中未分離膽管及結扎膽管位置過高,出現(xiàn)動物死亡和模型成功率僅40%。改進后實驗組造模成功率達90%。實驗組大鼠術后第1天有體重顯著減輕,但此后體重穩(wěn)定升高,但體重均低于實驗對照組。術后2天內(nèi)活動顯著減少,第3天后基本恢復正常,而假手術動物活力無明顯變化。實驗組動物自第1天出現(xiàn)黃疸,于術后第3天黃疸加重。對照組有一只出現(xiàn)黃疸,從組中剔除。膽總管結扎(bile duct ligation, BDL)后TBIL和DBIL兩組有顯著差異(P0.001)。ALT迅速增加,高峰在術后第1-2天,第3天后迅速下降。ALP術后第2天達到高峰,第3天后穩(wěn)步增加。 急性膽道梗阻后,肝組織學檢查顯示：梗阻時間延長,肝細胞發(fā)生變性壞死程度加重,伴有大量以中性粒細胞為主的炎性細胞浸潤,從膽管梗阻處逐漸轉向肝門。膠原染色特異性顯示膠原纖維為紅色,顯微鏡下觀察膠原纖維分布與含量兩組術后第1及2天無明顯差異,而術后第3、5、7天兩組的膠原含量及分布范圍有明顯差異。實驗組肝臟膠原纖維梗阻時間延長則增生明顯。 OV-6免疫組化陽性染色的細胞數(shù)目及分布范圍隨著梗阻時間的延長而增加,實驗組和對照組有明顯差異。(P0.05) 四、結論 1、按照本實驗描述的模型建立方法,簡單易行、重復性及穩(wěn)定性好,可以得到滿意急性膽道梗阻模型。造模成功率與分離膽管的精確度、結扎位置、力度、膽管側枝存在及動物個體差異性相關。 2、急性膽道梗阻后肝臟細胞損傷逐漸加重,膽道梗阻后第3天,是肝臟細胞急性損傷反應最強烈的時間點,之后機體開始進入自我調(diào)節(jié)及修復過程。膽道梗阻后7天,激活了具有分化能力的儲備細胞,修復過程伴隨著肝細胞間的纖維組織增生,出現(xiàn)纖維化,但未發(fā)現(xiàn)典型的肝臟假小葉形成。 3、本實驗發(fā)現(xiàn)卵圓細胞參與肝細胞在急性膽道梗阻后損傷的修復過程。肝卵圓細胞不僅是參與肝損傷修復的主導細胞,也是肝組織內(nèi)對進行性受損反應最敏感的一種細胞。受損的肝臟中卵圓細胞的增生規(guī)律與膠原纖維增生具有相似性。
【圖文】：

圖2肝臟毗鄰圖3造模失敗解剖所見(箭頭處為結扎線)①大鼠肝臟分為6葉，以肝門為中心逆時針依次為乳頭葉(2葉)、左外葉、左內(nèi)葉、中葉、右外葉和三角葉。各葉均具一肝蒂，為GliSSon系統(tǒng)和肝靜脈系統(tǒng)出入。乳頭葉離開肝門分為腹、背兩個葉片，相互交錯、重疊;中葉與左

圖2肝臟毗鄰圖3造模失敗解剖所見(箭頭處為結扎線)①大鼠肝臟分為6葉，以肝門為中心逆時針依次為乳頭葉(2葉)、左外葉、左內(nèi)葉、中葉、右外葉和三角葉。各葉均具一肝蒂，，為GliSSon系統(tǒng)和肝靜脈系統(tǒng)出入。乳頭葉離開肝門分為腹、背兩個葉片，相互交錯、重疊;中葉與左
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.6

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