【摘要】： 目的: 1、探討UCP-2在軟脂酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗中的表達(dá)及其作用。 2、探討UCP-2在軟脂酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗中的作用機(jī)制。 方法: 1.用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,并進(jìn)行常規(guī)傳代。 2、實(shí)驗(yàn)設(shè)立正常對照組、高胰島素組、軟脂酸組(PA組)和干預(yù)組。 3、檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中與胰島素抵抗及脂變相關(guān)的一些指標(biāo):葡萄糖、SOD、MDA、GGT、TG、ALT、ASL,油紅O鑒定HepG2細(xì)胞脂肪變性情況,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞膜電位變化,RT-PCR、Western Blot檢測UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白水平表達(dá)變化。 結(jié)果: 1、HepG2細(xì)胞的胰島素抵抗體外模型建立成功 用葡萄糖氧化酶法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中葡萄糖濃度,軟脂酸組葡萄糖濃度和高胰島素組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),表明用軟脂酸誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的胰島素抵抗體外模型成功建立。 2.對照組、軟脂酸組、干預(yù)組的ALT、AST、TG,GGT的變化 軟脂酸組ALT、AST、TG,GGT水平明顯高于其他兩組(P0.05),且有統(tǒng)計學(xué)意義,其他兩組無明顯差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.油紅O染色觀察各組細(xì)胞脂肪變性情況 對照組和干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)可見少量橘紅色脂滴,軟脂酸組細(xì)胞內(nèi)可見大量明顯脂滴。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞線粒體膜電位變化 軟脂酸組(PA組)膜電位降低,低于對照組和干預(yù)組,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 5.各組UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白表達(dá)的變化。 與對照組和干預(yù)組相比,軟脂酸組UCP-2、NF-κB蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05),IRS-2、PI-3K則軟脂酸組明顯低于對照組和干預(yù)組(P0.05),各組的mRNA表達(dá)水平隨蛋白同步升高或降低。 結(jié)論: 1、軟脂酸在體外成功誘導(dǎo)了HepG2細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗,同時發(fā)生了脂肪變性。 2、UCP2表達(dá)升高使線粒體膜電位降低,加重了細(xì)胞損害,加入抑制劑京尼平后,得到明顯改善。 3、通過檢測和胰島素信號傳導(dǎo)通路相關(guān)的IRS-2、PI3K的表達(dá)水平,在PA組二者均降低,加入UCP-2抑制劑京尼平后,二者表達(dá)升高,提示UCP-2在肝臟胰島素抵抗中起著重要作用,其機(jī)制可能和肝臟胰島素抵抗的信號傳導(dǎo)通路障礙有關(guān)。
【圖文】：

圖 2 軟脂酸誘導(dǎo) HepG2 細(xì)胞膜電位水平的變化Fig 2 Changs in mitochondriai membrane potential of HepG2 cell induced b: A :Control group; B: P A group; C: Intervention groupβ-actin GAPDH PI3K

各組UCP-2、IRS-2、及NF-κBmRNA表達(dá)變化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2652673