【摘要】：一、研究背景 年齡相關(guān)性白內(nèi)障(Age-related cataract，ARC)為全球首位致盲性眼病，隨著全球人口老齡化明顯加劇，其發(fā)病率將不斷增加。明確ARC的發(fā)生機(jī)理對(duì)于ARC的防治具有重要意義。ARC的確切發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為該病是由多種遺傳和環(huán)境因素共同導(dǎo)致的復(fù)雜性狀多基因病。最新研究發(fā)現(xiàn)生促紅素人肝細(xì)胞受體酪氨酸激酶A2(Eph-receptor tyrosinekinase-type A2，EphA2)基因是與ARC發(fā)生相關(guān)的一個(gè)重要基因。國外研究證實(shí)高加索人群EphA2基因多態(tài)性與皮質(zhì)性ARC相關(guān)，但EphA2基因突變導(dǎo)致ARC的機(jī)制尚不清楚。有關(guān)中國漢族人群中ARC與EphA2基因多態(tài)性的研究尚無報(bào)道。 晶狀體上皮細(xì)胞凋亡異常是除先天性白內(nèi)障外各種白內(nèi)障的重要的致病機(jī)制。EphA2受體廣泛表達(dá)于上皮來源的細(xì)胞，其介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)，如活化MAPK途徑，導(dǎo)致ERK活化，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、細(xì)胞間粘附、細(xì)胞遷移和細(xì)胞凋亡等多種功能。衰老是ARC最為重要的一個(gè)危險(xiǎn)因素，我們推測EphA2基因變異可能是通過影響EphA2的表達(dá)或磷酸化水平，影響MAPK/ERK通路的信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡，從而導(dǎo)致ARC的發(fā)生，而老化則強(qiáng)化了這個(gè)致病過程，加速了ARC的發(fā)生。 二、研究目的 分析中國漢族人群中EphA2基因多態(tài)性與皮質(zhì)性ARC易感性的關(guān)系；探討EphA2多態(tài)性及老化對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的影響以及MAPK/ERK信號(hào)通路在ARC發(fā)生發(fā)展中的作用，闡明ARC發(fā)生的分子機(jī)制。 三、研究內(nèi)容 1.采用大樣本病例對(duì)照研究方法，選取EphA2基因的五個(gè)位點(diǎn)(rs3768293、rs3754334、rs477558、rs707455和rs7548209)，用PCR-RFLP方法進(jìn)行EphA2基因分型，比較等位基因頻率及基因型頻率分布在皮質(zhì)性ARC患者和健康對(duì)照組之間是否存在差異，明確EphA2基因多態(tài)性與ARC易感性的關(guān)系，找出疾病相關(guān)的SNPs。 2.收集ARC患者晶狀體前囊膜上皮組織，以角膜移植術(shù)中的透明晶狀體前囊膜上皮組織作為健康對(duì)照，用熒光定量PCR法檢測EphA2及ERK1/2的mRNA表達(dá)變化，Western-Blot方法檢測EphA2、p-EphA2、ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表達(dá)。探討EphA2與ERK1/2在ARC患者晶狀體前囊膜上皮組織中的表達(dá)及意義。 3.檢測ARC患者晶狀體前囊膜上皮組織caspase-3，caspase-9和bcl-2的mRNA表達(dá)變化及caspase-3，active caspase-3的蛋白表達(dá)，探討凋亡相關(guān)基因在ARC發(fā)生發(fā)展中的作用。 四、研究結(jié)果 1.對(duì)422例皮質(zhì)性ARC患者及317例健康對(duì)照EphA2基因5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行分型，發(fā)現(xiàn)EphA2基因rs477558和rs7548209位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在ARC患者和健康對(duì)照組之間有顯著的差異。ARC患者rs477558AA基因型、rs7548209GG基因型及rs7548209G等位基因的頻率均顯著高于健康對(duì)照組(Pc 0.05)；ARC患者rs477558AG基因型、rs7548209CG基因型及rs7548209C等位基因的頻率均顯著低于健康對(duì)照組(Pc 0.05)；而EphA2基因的rs3768293，rs3754334和rs707455位點(diǎn)等位基因和基因型頻率分布，在ARC患者和健康對(duì)照組之間均無顯著差異(Pc0.05)。另外對(duì)年齡進(jìn)行的分層分析發(fā)現(xiàn)，年齡≥75歲組ARC患者rs7548209位點(diǎn)的GG基因型和G等位基因頻率顯著高于健康對(duì)照組(Pc 0.05)。 2. ARC患者晶狀體前囊膜上皮組織中EphA2、ERK1/2的mRNA及蛋白表達(dá)水平和p-EphA2、p-ERK1/2的蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P0.01)。不同年齡、同種基因型組ARC患者之間比較，年齡≥75歲組EphA2、ERK1/2的mRNA及蛋白表達(dá)水平和p-EphA2、p-ERK1/2的蛋白表達(dá)水平明顯低于年齡75歲組(P 0.05)。相同年齡，不同基因型組(EphA2GG、EphA2CG和EphA2CC)ARC患者之間，EphA2、ERK1/2的mRNA及蛋白表達(dá)水平和p-EphA2、p-ERK1/2的蛋白表達(dá)水平均沒有顯著差異(P0.05)。 3. ARC患者晶狀體前囊膜上皮組織中caspase-3，caspase-9的mRNA水平及caspase-3、active caspase-3的蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P 0.01)。不同年齡、同種基因型組ARC患者之間比較，年齡≥75歲組caspase-3、caspase-9的mRNA水平及caspase-3，active caspase-3的蛋白表達(dá)水平明顯高于年齡75歲組(P 0.05)。相同年齡組，不同基因型組(EphA2~(GG)、EphA2~(CG)和EphA2~(CC))ARC患者之間，其caspase-3，caspase-9的mRNA水平及caspase-3，active caspase-3的蛋白表達(dá)水平均沒有顯著差異(P0.05)。 與健康對(duì)照組比較，各組ARC患者晶狀體前囊膜上皮組織bcl-2的mRNA水平均明顯降低(P 0.01)。不同年齡、同種基因型組ARC患者之間比較，年齡≥75歲組bcl-2的mRNA水平明顯低于年齡75歲組(P 0.05)。相同年齡，不同基因型組(EphA2GG、EphA2CG和EphA2CC)ARC患者之間，bcl-2的mRNA水平均沒有顯著差異(P0.05)。 五、結(jié)論 1. EphA2基因多態(tài)性與中國漢族皮質(zhì)性ARC的遺傳易感性相關(guān)；且經(jīng)年齡分層分析發(fā)現(xiàn)rs7548209的GG基因型和G等位基因的頻率分布隨年齡增長而增加。 2.年齡增長(或老化)可顯著影響與白內(nèi)障發(fā)生有關(guān)的晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡，其機(jī)理可能與EphA2表達(dá)與活性降低，抑制了ERK1/2信號(hào)通路，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡有關(guān)。 3. EphA2rs7548209位點(diǎn)的多態(tài)性不改變晶狀體上皮細(xì)胞EphA2的水平，也不影響細(xì)胞凋亡，提示rs7548209多態(tài)性可能僅是疾病的標(biāo)記而非疾病的致病原因(致病性SNP)。 4. EphA2rs7548209多態(tài)性使ARC發(fā)生率增加的原因可能是年齡增長(或老化)使晶狀體上皮細(xì)胞凋亡增加與rs7548209多態(tài)性引起ARC的其他未知因素共同作用的結(jié)果。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R776.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 管懷進(jìn);;基因多態(tài)性與復(fù)合性眼病[J];南通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

2 姚克,王凱軍,徐雯,孫朝暉,申屠形超,邱培瑾;Caspase-3 and its inhibitor Ac-DEVD-CHO in rat lens epithelial cell apoptosis induced by hydrogen in vitro[J];Chinese Medical Journal;2003年07期

本文編號(hào)：2805749