【摘要】：目的:明確早期前房沖洗術(shù)在治療兔角膜堿燒傷的療效及其病程轉(zhuǎn)歸,觀察早期前房沖洗對堿燒傷角膜的影響及其病理變化,觀察堿燒傷角膜IL-1β與TGF-β2表達(dá)水平、蛋白分布以及早期前房沖洗對其影響。方法:48只新西蘭白兔隨機(jī)分為4組。A組16只,右眼均于燒傷后2h行前房沖洗。B組16只,右眼均于燒傷后12h行前房沖洗。C組16只,右眼均于燒傷后24h行前房沖洗。D組于A、B、C三組中隨機(jī)選取左眼16只行堿燒傷處理,作陰性對照組。以裂隙燈檢查法觀察角膜混濁情況、新生血管、上皮缺損等情況,活體共聚焦顯微鏡觀察角膜結(jié)構(gòu)變化;各組分別于燒傷后1、4、7、14d處死取樣,以Q-PCR檢測各組間角膜中TGF-β2以及IL-1β的含量,免疫組織化學(xué)方法觀察TGF-β2和IL-1β的來源。組織病理學(xué)方法觀察炎性細(xì)胞的浸潤、角膜結(jié)構(gòu)的病理變化。結(jié)果:1.所有兔眼,堿燒傷模型建模成功當(dāng)天混濁評(píng)分組間差異無顯著性(P0.05);A、B組于第1、4、7、14d低于C、D組(P0.05),A組于第7、14d低于B組(P0.05)。C組于1、4、7、14d混濁評(píng)分與D組有差異(P0.05)2.病理組織學(xué)檢查:(1)HE染色示角膜堿燒傷是以PMN為主浸潤角膜的炎癥,可見角膜纖維紊亂,成纖維細(xì)胞增生。(2)A、B、C組炎癥細(xì)胞浸潤程度、成纖維細(xì)胞數(shù)量、纖維紊亂及壞死程度較D組降低,但A組與B組無明顯差異。3.免疫組化示:1、IL-1β:(1)堿燒傷角膜組織中IL-1β表達(dá)升高,主要表達(dá)于炎癥細(xì)胞、角膜上皮基底細(xì)胞胞質(zhì)、成纖維細(xì)胞;D組角膜IL-1β隨時(shí)間表達(dá)逐漸升高,在第4d顯著上升,第14d表達(dá)最高。(2)A組在第7d、第14d表達(dá)明顯低于對照組與C組(P0.05);(3)在第1d,A、B、C、D四組間角膜組織中IL-1β免疫組化評(píng)分比較差異不顯著(P0.05),在第4、7、14d,A、B、C組表達(dá)低于D組(P0.05),A、B組間各時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、TGF-β2:(1)堿燒傷角膜組織中TGF-β2表達(dá)升高,主要表達(dá)于角膜上皮基底細(xì)胞膜、胞質(zhì),以及基質(zhì)成纖維細(xì)胞處,在上皮增生和基質(zhì)修復(fù)處也可見表達(dá)。在角膜損傷區(qū)域中央上皮及基質(zhì)處表達(dá)明顯高于周邊區(qū)。對照組中,TGF-β2在第7d達(dá)到高峰,第14d有所下降。,(2)A組在第4、7、14d表達(dá)均低于其他三組(P0.05)。B組在第4、7d表達(dá)低于C、D二組(P0.05)。4.Q-PCR結(jié)果顯示:1、IL-1β:(1)堿燒傷角膜組織IL-1β基因表達(dá)隨時(shí)間逐漸增加,在第4d顯著上升,在第14d達(dá)到高峰。(2)A組在第4d達(dá)到高峰,隨后逐漸下降,在各時(shí)間段表達(dá)低于D組(P0.05),與C組在第7d、14d有明顯差異(P0.05),但與B組各時(shí)間段無明顯差異(P0.05)。2、TGF-β2:(1)堿燒傷角膜組織TGF-β2基因表達(dá)逐漸上升,在第7d達(dá)到高峰,第14d下降;A組在各時(shí)間段均低于C、D組(P0.05),與B組于第7、14d有明顯差異(P0.05)。5.活體共聚焦顯微鏡示:(1)堿燒傷后1d,兔角膜上皮細(xì)胞腫脹,部分區(qū)域看不到上皮細(xì)胞,淺基質(zhì)出現(xiàn)細(xì)小點(diǎn)狀的炎性細(xì)胞。(2)第4d,兔角膜上皮細(xì)胞缺失增多;淺基質(zhì)細(xì)胞邊界模糊,明顯腫脹,炎性細(xì)胞增多;內(nèi)皮細(xì)胞邊界模糊,呈多形性改變,細(xì)胞間隙增大,連接較為疏松,但未見明顯炎癥細(xì)胞。(3)第7d,兔角膜上皮繼續(xù)缺失;淺基質(zhì)細(xì)胞腫脹,炎性細(xì)胞增多,偶見新生血管內(nèi)皮,深基質(zhì)層細(xì)胞減少;內(nèi)皮細(xì)胞可見缺失。(4)第14d,基質(zhì)層及上皮可見瘢痕形成,全基質(zhì)可見大量炎性細(xì)胞。早期沖洗組中,上皮細(xì)胞缺失較少,內(nèi)皮細(xì)胞始終未見明顯缺失,基質(zhì)炎性細(xì)胞較對照組明顯較少。結(jié)論:1.早期前房沖洗可降低堿燒傷角膜的潰瘍評(píng)分和炎癥壞死程度,有助于上皮修復(fù),減少瘢痕形成。2.早期前房沖洗可能降低堿燒傷角膜組織中的IL-1β表達(dá)水平,從而減輕炎癥反應(yīng),抑制潰瘍形成。3.角膜組織中的TGF-β2主要在堿燒傷修復(fù)期表達(dá),早期前房沖洗可能降低其表達(dá),從而促進(jìn)上皮愈合,減少角膜異常修復(fù),降低瘢痕形成。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R779.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2785255